Method Article

الكشف الكمي عن البكتيريا المتعددة باستخدام الكريات المجهرية المغناطيسية ذات العلامات الصبغية

December 23rd, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_content" >

يوضح هذا الفيديو الكشف الكمي عن البكتيريا المتعددة الإرسال باستخدام كريات مجهرية من البوليسترين المغناطيسي الكربوكسيل المصبوغ في مجموعات متميزة. يشمل الإجراء تكوين مجمعات بكتيريا الخرز ، والفصل المغناطيسي ، والتحليل القائم على التدفق ، مما يتيح القياس الكمي الدقيق والمتزامن لبكتيريا متعددة في نفس التفاعل جيدا.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. الاقتران التساهمي للأجسام المضادة الملتقطة بالكريات المجهرية MagPlex

يتم اقتران كل جسم مضاد للالتقاط مع مجموعة مجهرية مغناطيسية كربوكسية محددة باستخدام إجراء من خطوتين كما هو موضح أدناه.

ملاحظة: تتوفر أيضا مجموعة أدوات التوصيل بما في ذلك جميع الكواشف والمخازن المؤقتة والمواد المطلوبة لاقتران الكرة المجهرية (انظر جدول المواد).

  1. أعد تعليق المخزون المعلق المجهري غير المقترن وفقا للتعليمات الموضحة في ورقة معلومات المنتج المتوفرة مع الكرات المجهرية الخاصة بك.
    ملاحظه: تعتمد تعليمات إعادة التعليق على حجم وحجم قوارير الكر....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: سير عمل المقايسة المناعية لساندويتش الالتقاط متعدد الإرسال. يتم توزيع خليط متعدد الإرسال من الكريات المجهرية المقترنة بالأجسام المضادة في كل بئر ، وتضاف العينة. بعد الحضانة لمدة 1 ساعة ، يتم غسل التفاعلات ، وتضاف الأجسام المضادة للكشف عن البيوتينيل. بعد حضانة لمدة ساعة واحدة ، يتم غسل ردود الفعل مرة أخرى ، ويضاف مراسل SAPE. يتم تحضين التفاعلات لمدة 30 دقيقة ، وغسل.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments MagPlex® المجهرية لومينيكس® MC100xx-YY انظر الموقع للحصول على أرقام الكتالوج الفردية (https://www.luminexcorp.com/magplex-microspheres/#order) 1.5 مل أنابيب الطرد المركزي الدقيقة إيبندورف™ 22431081 بروتين LoBind® 0.1 م فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة (NaH2PO4) ، الرقم الهيدروجيني 6.2 MilliporeSigma S3139 المخزن المؤقت للتنشيط 1-إيثيل -3- [3-ثنائي ميثيل أمينوبروبيل] كاربوديميد هيدروكلوريد (EDC) الترمو: العلمية™ بيرس™ 77149 N-hydroxysulfosuccinimide (Sulfo-NHS) الترمو: العلمية ™ بيرس™ 24510 محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، درجة الحموضة 7.4 MilliporeSigma ص 3813 المخزن المؤقت للاقتران طقم اقتران الأجسام المضادة xMAP® لومينيكس® 40-50016 مجموعة اختيارية متاحة لاقتران الكرة المجهرية. الأجسام المضادة للبشريحة القولونية O157: H7 سيرا كير 5310-0326 متعدد النسيلة ، يستخدم لكل من الالتقاط والكشف الأجسام المضادة للسالمونيلا CSA-Plus سيرا كير 5310-0321 متعدد النسيلة ، يستخدم لكل من الالتقاط والكشف الأجسام المضادة للعطيفة سيرا كير 5310-0324 متعدد النسيلة ، يستخدم لكل من الالتقاط والكشف الأجسام المضادة لليستيريا سيرا كير 5310-0319 متعدد النسيلة ، خاص بالجنس ، يستخدم لكل من الالتقاط والكشف PBS ، درجة الحموضة 7.4 تحتوي على 0.02٪ توين -20 ، 0.1٪ BSA ، 0.05٪ أزيد الصوديوم (PBS-TBN) MilliporeSigma P3563
A7888
إس 8032 يمكن استخدام ما يصل إلى 1٪ BSA الأجسام المضادة للإشريكية القولونية O157: H7 سيرا كير 5310-0326 متعدد النسيلة (EZ-لينك سلفو-NHS-LC-البيوتين) (بيرس). الترمو: العلمية™ أ39257 الإشريكية القولونية O157: H7 سيرا كير 5370-0013 قتل الحرارة السالمونيلا
النمط المصلي Typhimurium سيرا كير 5370-0002 قتل الحرارة العطيفة الصائمية سيرا كير 5370-0011 قتل الحرارة الليستيريا monocytogenes سيرا كير 5370-0010 قتل الحرارة ستربتافيدين ، R-Phycoerythrin Contringate (SAPE) الترمو: العلمية™ S866

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Magnetic MicrospheresBacterial DetectionFlow Based AnalysisAntibody ConjugationMagnetic SeparationMultiplexed QuantificationFluorescent ReporterStreptavidin BindingBead Bacteria ComplexesSpectral Signatures

Related Articles