فحوصات للتقييم النوعي والكمي لتركيزات الجلوكوز في بول الفئران

الملخص

< p class = "jove_content" >

يوضح هذا الفيديو إجراء لجمع بول الفأر وتقييم مستويات الجلوكوز لديه. لتقييم مستوى الجلوكوز ، اغمر شريط اختبار مغطى بالإنزيمات وصبغة كروموجينيك في العينة ، مما يؤدي إلى تغيير اللون الذي يشير إلى مستويات الجلوكوز. لقياس مستويات الجلوكوز في البول ، أدخل عينة بول إلى صفيحة متعددة الآبار بتركيزات الجلوكوز المتصاعدة ، وأضف خليط التفاعل ، واحتضنها. قم بقياس الامتصاص لإنشاء منحنى قياسي وحساب مستويات الجلوكوز بناء على امتصاص العينة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. اختبار جلوكوز البول الموضعي

1. ضع قطعة من البارافيلم النظيف على سطح مستو.
2. التقط الفأر برفق من الذيل وضعه على Parafilm.
3. كبح الماوس عن طريق القفص باستخدام الإبهام والسبابة. التقط الماوس برفق أثناء تقييده عند القفظة ، مما يتسبب في تبول الفأر كرد فعل للتوتر. اترك قطرة من البول تسقط على سطح البارافيلم. أعد الفأر إلى قفصه بعد جمع قطرة البول.
4. اغمس نهاية الكاشف لشريط Diastix في قطرة البول الطازجة التي تم جمعها على سطح Parafilm. قم بإزالة الشريط على الفور وضعه بشكل مسطح على سطح بحيث يكون جانب اللون لأعلى. انتظر 30 ثانية على الأقل حتى يتطور اللون على الشريط بالكامل. قارن اللون المطور مع المخطط المرجعي الموجود في حاوية Diastix (الشكل 1).< / > النصائح: إذا لم يتبول الفأر على البارافيلم ، فاضغط برفق على أسفل بطن الفأر (حول المثانة البولية) باستخدام السبابة. سيساعد هذا النهج في إطلاق قطرات البول على البارافيلم. بالنسبة للفئران التي لا تتبول بعد اتباع الإجراء الموضح أعلاه ، انتظر 20 دقيقة وابدأ الإجراء مرة أخرى. التأكد من تنفيذ جميع الإجراءات مع الالتزام بإرشادات IACUC.

< p class = "jove_title" >2. جمع البول لمدة 24 ساعة باستخدام قفص التمثيل الغذائي للفأر

1. قم بتجميع قفص التمثيل الغذائي Tecniplast (الشكل 2) وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
2. املأ مجموعة التغذية بمسحوق الطعام ثم قم بتوصيل مجموعة التغذية بعلامة التبويب المعدنية المناسبة في الغرفة العلوية.
3. ثبت دعامة زجاجة الماء على اللسان المعدني المتبقي في الغرفة العلوية.
4. املأ زجاجة الماء الفارغة ثم حركها في دعامة الزجاجة ، مع التأكد من وجود أنبوب الشرب في الحفرة.
5. ضع الفأر في القفص الأيضي ثم قم بتغطيته بغطاء.
6. تأكد من تركيب غطاء القفص بشكل صحيح.
7. ضع أنبوب جمع البول وأنبوب جمع البراز في أماكنهما المناسبة على أرضية الغرفة السفلية.
8. بعد 24 ساعة ، استرجع أنبوب جمع البول وقم بإجراء فحص الجلوكوز لتحديد تركيز الجلوكوز في البول. إذا لم يتم إجراء فحص الجلوكوز في نفس اليوم ، فقم بتجميد عينة البول في الفريزر -80 درجة مئوية.

< ص الفئة = "jove_title">3. تحديد تركيز الجلوكوز في البول لمدة 24 ساعة

1. إذا تم تخزين عينة البول عند -80 درجة مئوية ، اترك العينة تذوب قبل إجراء فحص الجلوكوز.
2. من مخزون 100 مجم / ديسيلتر ، قم بإعداد ثمانية معايير تتراوح من 25 مجم / ديسيلتر إلى 0 مجم / ديسيلتر وفقا لتوجيهات مجموعة الفحص.
3. قم بإعداد الآبار القياسية وآبار عينات البول في طبق سعة 96 بئرا ، كل ذلك في نسخ مكررة ، وفقا لدليل المجموعة.
4. بعد بدء التفاعل عن طريق إضافة الكمية الموصى بها من خليط الإنزيم إلى جميع الآبار ، قم بتغطية اللوحة واتركها تحتضن لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية.
5. اقرأ الامتصاص عند 500-520 نانومتر باستخدام قارئ لوحة.
6. قم بتحليل البيانات وفقا لتعليمات مجموعة الفحص. ارسم امتصاص كل معيار مقابل تركيز الجلوكوز واستخدم الرسم البياني لتحديد تركيز الجلوكوز لعينة البول على مدار 24 ساعة.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1. اختبار جلوكوز البول الموضعي. قطرات بول الفأر التي تم جمعها على Parafilm والمخطط المرجعي للألوان الموجود على حاوية Diastix.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 2. قفص التمثيل الغذائي Tecniplast لجمع بول الفأر لمدة 24 ساعة. يتم وضع الف...