مقالة منهجية

نقل البلاعم الأولية باستخدام mRNA المعدل

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Herb ، M. et al. ، تعداء عالي الكفاءة للبلاعم الأولية باستخدام mRNA المنسوخ في المختبر. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو عملية نقل البلاعم الأولية باستخدام mRNA المعدل الذي يشفر بروتين الفلورسنت الأخضر. تضمن هذه الرنا المرسال المعدلة ، المصممة لتقليل المناعة وتحسين استقرارها ، التعداء الناجح والتعبير اللاحق عن بروتينات الفلورسنت الخضراء ، والتي يتم تأكيدها من خلال الفحص المجهري الفلوري.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

ملاحظة: قم بتنفيذ جميع الخطوات مرتديا القفازات. قم بتنفيذ جميع خطوات التعدي تحت غطاء التدفق الصفحي لمنع تلوث الخلايا. قبل العمل باستخدام mRNA، قم بتنظيف جميع الأدوات مثل الماصات وكل سطح بنسبة 70٪ من الإيثانول و / أو مادة خافضة للتوتر السطحي تحلل RNAse (جدول المواد). تأكد من أن جميع أنابيب التفاعل خالية من الحمض النووي الريبي ومعقمة. استخدم فقط الماء المعقم الخالي من الحمض النووي الريبي للتخفيفات. استخدم أطراف الماصة حصريا مع المرشحات. قم بتغيير أطراف الماصة بعد كل خطوة سحب العينة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 5-ميثيل CTP (100 مليمتر) جينا بيوسيانس NU-1138S مخزنة في -20 درجة مئوية فوسفاتيز أنتاركتيكا نيو إنجلاند بيولابز M0289 مخزنة في -20 درجة مئوية المخزن المؤقت لتفاعل الفوسفاتيز في القطب الجنوبي (10X) نيو إنجلاند بيولابز ب 0289 مخزنة في -20 درجة مئوية الأجسام المضادة ل NEMO / IKKγ إنفيتروجين MA1-41046 مخزنة في -20 درجة مئوية الأجسام المضادة المضادة β الأكتين سيجما ألدريتش أ 2228 مخزنة في -20 درجة مئوية أطباق بتري 92,16 ملم مع كاميرات سارستيدت 8,21,473 مخزنة في RT CD11b Microbeads الفأر والإنسان ميلتيني بيوتيك 130-049-601 مخزنة في 4 درجات مئوية Cre recombinase + T7-Promotor التمهيدي الأمامي سيجما ألدريتش 5′-GAAATTAATACGACTCACTATA
GGGGCAGCCCCCCATGTCC
AATTTACTGACCGTAC-3 '، مخزن عند -20 درجة مئوية Cre recombinase + T7-Promotor التمهيدي العكسي سيجما ألدريتش 5 ′-CTAATCGCCATCTTCCAGCAGG
C-3 ′ ، مخزنة عند -20 درجة مئوية طقم تنقية الحمض النووي: طقم تنقية QIAquick PCR كياجين هاتف: 28104 مخزنة في RT eGFP + T7-Promotor التمهيدي الأمامي سيجما ألدريتش 5'-GAAATTAATACGACTCACTATA
GGGATCCATCGCCACCATGGTG
AGCAAGG-3 '، مخزن عند -20 درجة مئوية التمهيدي العكسي eGFP + T7-Promotor سيجما ألدريتش 5'-TGGTATGGCTGATTA
TGATCTAGAGTCG-3 '، مخزنة عند -20 درجة مئوية المخزن المؤقت سريع الهضم (10X) الترمو: العلمية ب 64 مخزنة في -20 درجة مئوية برنامج FastDigest XbaI الترمو: العلمية FD0684 مخزنة في -20 درجة مئوية بوليميراز عالي الدقة مع التدقيق اللغوي: Q5 DNA عالي الدقة - بوليميراز شركة نيو إنجلاند بيولابز M0491S مخزنة في -20 درجة مئوية IKKβ + T7-Promotor التمهيدي الأمامي سيجما ألدريتش 5′-GAAATTAATACGACTCACTATA
GGGTTGATCTACCATGGACTACA
AAGACG-3 ′ ، مخزنة عند -20 درجة مئوية IKKβ + T7-Promotor التمهيدي العكسي سيجما ألدريتش 5′-GAGGAAGCGAGAGCT-CCATCTG-3 ′ ، مخزنة عند -20 درجة مئوية طقم نسخ الحمض النووي الريبي المرسال في المختبر: مجموعة HiScribe T7 ARCA mRNA (مع مخلفات polyA) نيو إنجلاند بيولابز E2060 مخزنة في -20 درجة مئوية أعمدة LS ميلتيني بيوتيك 130-042-401 مخزنة في RT ماك متعددة الحامل ميلتيني بيوتيك 130-042-303 مخزنة في RT المخزن المؤقت لنقل الرنا المرسال والكاشف: jetMESSENGER تعداء بول بلس 409-0001 دي مخزنة في 4 درجات مئوية طفرة IKKβ IKK-2S177 / 181E البلازميد أدجين هاتف 11105 مخزنة في -20 درجة مئوية بلازميد NEMOC54 / 347A متحولة أدجين هاتف: 27268 مخزنة في -20 درجة مئوية بلازميد pEGFP-N3 أدجين 62043 مخزنة في -20 درجة مئوية بولي (أنا: ج) كالبيوكيم 528906 مخزنة في -20 درجة مئوية بلازميد pPGK-Cre F.T. Wunderlich ، H. Wildner ، K. Rajewsky ، F. Edenhofer ، متغيرات جديدة من Cre recombinase المحفز: يظهر طفرة جديدة من بروتين اندماج Cre-PR حساسية محسنة ونطاقا موسعا من التحفيز. الأحماض النووية Res. 29 ، 47e (2001). مخزنة في -20 درجة مئوية زائف UTP (100 مل) جينا بيوسيانس NU-1139S مخزنة في -20 درجة مئوية فاصل QuadroMACS ميلتيني بيوتيك 130-090-976 مخزنة في RT الجسم المضاد CD11b المضاد للفئران ، مترافق APC بيو ليجند 101212 مخزنة في 4 درجات مئوية الجسم المضاد F4 / 80 المضاد للفئران ، مترافق PE العلوم البيولوجية الإلكترونية 12-4801-82 مخزنة في 4 درجات مئوية مؤتلف M-CSF بيبروتك 315-02 مخزنة في -20 درجة مئوية طقم تنقية الحمض النووي الريبي: طقم تنظيف النسخ MEGAclear ثيرموفيشر العلمي AM1908 مخزنة في 4 درجات مئوية الفاعل بالسطح المتحلل للRNASE: RnaseZAP سيجما ألدريتش R2020 مخزنة في RT LPS فائق النقاء من الإشريكية القولونية O111: B4 إنفيفوجين مخزنة في -20 درجة مئوية بلازميد IKKβ من النوع البري أدجين هاتف 11103 مخزنة في -20 درجة مئوية بلازميد NEMO من النوع البري أدجين هاتف: 27268 مخزنة في -20 درجة مئوية

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة