العلاج المناعي الضوئي بالأشعة تحت الحمراء القريبة للقضاء على الخلايا المستهدفة في الثقافات ثلاثية الأبعاد المختلطة

الملخص

المصدر: Sato ، K. et al. ، القضاء الانتقائي على الخلايا من ثقافة 3D مختلطة باستخدام تقنية العلاج المناعي الضوئي بالأشعة تحت الحمراء القريبة.J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو تقنية لإزالة خلايا معينة بشكل انتقائي من ثقافة الخلايا ثلاثية الأبعاد المختلطة من خلال العلاج المناعي الضوئي بالأشعة تحت الحمراء القريبة. في هذه الطريقة ، يتم تحديد الخلايا المستهدفة بدقة باستخدام جسم مضاد مقترن بجهاز امتصاص ضوئي NIR. يؤدي التشعيع اللاحق بضوء الأشعة تحت الحمراء إلى موت الخلايا ، مما يؤدي بشكل فعال إلى القضاء على الخلايا المستهدفة من الثقافة ثلاثية الأبعاد.

البروتوكول

ملاحظة: يصف البروتوكول التالي الخطوات اللازمة للقضاء على خلايا معينة باستخدام العلاج المناعي الضوئي بالأشعة تحت الحمراء القريبة (NIR-PIT). يمكن العثور على عناصر التحكم والتفاصيل الأخرى حول NIR-PIT وقابلية الخلية للحياة في مكان آخر.

< p class = "jove_title" >1. اقتران الأشعة تحت الحمراء 700 (IR700) إلى الأجسام المضادة وحيدة النسيلة (mAb)

1. تحضير mAb محل الاهتمام عند 2-5 مجم / مل في محلول فوسفات هيدروجين ثنائي الصوديوم 0.1 M (Na₂HPO₄) (درجة الحموضة 8.6).
2. امزج 6.8 نانومول من mAb مع 30.8 نانومول من 10 mM IR700 في محلول 0.1 M Na₂HPO₄ (درجة الحموضة 8.6) في أنبوب طرد مر....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1. القضاء على الخلايا المستهدفة في الخلايا الكروية ثلاثية الأبعاد (الكرويات المختلطة لخلايا A431-luc-GFP و 3T3-RFP).(أ) يظهر نظام NIR-PIT (2 J / cm²). (ب) قضى NIR-PIT المتكرر تماما على الخلايا المستهدفة (A431-luc-GFP) دون أي ضرر للخلايا غير المستهدفة (3T3-RFP) ، في كروي مختلط ثلاثي الأبعاد. شريط = 200 ميكرومتر. (ج) أظهر ال.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات IRDye 700DX إستر صبغة الأشعة تحت الحمراء LI-COR Bioscience (لينكولن ، شمال شرق ، الولايات المتحدة الأمريكية) 929-70011 Na2HPO4 سيجما ألدريتش (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) S9763 عمود Sephadex G25 (PD-10) جنرال إلكتريك للرعاية الصحية (بيسكاتواي ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية) 17-0851-01 كوماس (برادفورد) بالإضافة إلى فحص البروتين شركة ثيرمو فيشر العلمية (والثام ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) بي -23200 لوحات إسقاط معلقة Perfecta3D 96 جيدا شركة 3D Biomatrix Inc (آن أربور ، ميشيغان ، الولايات المتحدة الأمريكية) HDP1096-8 عداد الطاقة الضوئية ثورلابس (نيوتن ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية) PM100 الصمام: L690-66-60 شركة ماروبيني أمريكا (سانتا كلارا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) L690-66-60 فيكتيبيكس (بانيتوموماب) أمجين (ثاوزند أوكس ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) طبق سفلي زجاجي 35 مم ، حجم الطبق 35 مم ، حجم البئر 10 مم سيلفيس (ماونتن فيو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) D35-10-0-N