Method Article

قمع تكاثر فيروس التهاب الكبد B باستخدام الخلايا التائية الخاصة بمستضد الفيروس

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_content" >المصدر: Xiong، X.، et al. الخلايا الليمفاوية التائية الفيروسية المشتقة من الخلايا الجذعية تمنع تكاثر فيروس التهاب الكبد B في الفئران.

يوضح الفيديو فحصا باستخدام خلايا CD8 + T المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات (iPSC) التي يسببها الإنسان (iPSC) لتثبيط تكاثر فيروس التهاب الكبد B (HBV) في الفئران. يتم نقل هذه الخلايا التائية ، المصممة بمستقبلات خاصة بفيروس التهاب الكبد B ، إلى فئران معدلة وراثيا. ثم يتم حقن بلازميدات جينوم فيروس التهاب الكبد B المختصة بالنسخ المتماثل مباشرة في الكبد ، مما يتيح امتصاص الحمض النووي الفيروسي. بمجرد التعبير عن المستضدات الفيروسية وتقديمها بواسطة جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير الهجينة ، تتعرف الخلايا التائية المهندسة على هذه المجمعات وترتبط بها. يؤدي هذا إلى إطلاق جزيئات سامة للخلايا ، مما يؤدي إلى تدمير خلايا الكبد المصابة بفيروس التهاب الكبد B وقمع تكاثر الفيروس.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل
المحلي لجنة رعاية المؤسسية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE. تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.

فئة < ص = "jove_title" >1. توليد خلايا CD8 + T الخاصة ب Ag الفيروسية من iPSCs (خلايا تائية iPSC-CD8 +)

  1. إنشاء التركيبات الفيروسية القهقرية
    ملاحظه: ترتبط جينات مستقبلات الخلايا التائية (TCR) α و β بتسلسل الشق الذاتي 2A. ناقل الفيروس القهقري MSCV-IRES-DsRed (MiDR) هو DsRed+.
    1. استنساخ فرعي HBs183-191 (FLLTRILTI) خاص ب A2 الجينات الهجينة TCR (s183 TCR) (Vα34 و Vβ28) في M....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: توليد خلايا iPSC-CD8 + T الفيروسية الخاصة بفيروس التهاب الكبد Bv.

< ف فئة = "jove_content">يتم نقل iPSCs الماوس مع التركيبات الفيروسية القهقرية التالية: HBs183-91 TCR (MiDR-s183 TCR) أو OVA257–264 TCR (MiDR-OVA TCR), ويتم استزراع iPSCs المنقولة بالاشتراك مع الخلايا اللحمية OP9-DL1/DL4 لتمايز النسب T. (أ) التمثيل التخطيطي لبناء الفيروسات القهقرية MiDR-s183 TCR .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments الفئران HHD معهد باستور ، باريس ، فرنسا H-2 الفئة الأولى بالضربة القاضية ، الفئران المعدلة وراثيا HLA-A2.1 (HHD) آي بي إس - MEF - نغ - 20 دي - 17 بنك RIKEN الخلوي APS0001 SNL76 / 7 ATCC اللجنة الصليب الأحمر العليا - 1049 منلو 9 ATCC رقم ال CRL-2749 بلازميد pAAV / HBV1.2 الدكتور باي جير تشين (مستشفى جامعة تايوان الوطنية ، تايوان) بناء الحمض النووي HBV HBs183-91 (s183) (FLLTRILTI) جينات TCR الخاصة الدكتور آدم جيه جيرينغ (معهد أبحاث مستشفى تورنتو العام ، تورنتو ، كندا) جينات TCR الهجينة المقيدة ب A2 الخاصة ب FLLTRILTI (Vα34 و Vβ28) جينات TCR الخاصة ب OVA257-264 الدكتور داريو أ. فيجنالي (جامعة بيتسبرغ ، بنسلفانيا) جينات TCR المقيدة ب H-2Kb الخاصة ب SIINFEKL الأجسام المضادة ل CD3 (17A2) بيوليجند 100236 الجسم المضاد المضاد ل CD44 (IM7) BD Pharmingen 103012 الجسم المضاد المضاد ل CD4 (GK1.5) بيوليجند 100408 الجسم المضاد المضاد ل CD8 (53-6.7) بيوليجند 100732 الجسم المضاد ل IFN-γ (XMG1.2) بيوليجند 505810 الجسم المضاد لعامل نخر الورم (MP6-XT22) بيوليجند 506306 α-MEM إنفيتروجين أ10490-01 الجسم المضاد ل HBs ثيرمو فيشر MA5-13059 عازلة تحلل ACK لونزا 10-548 ه بريفيلدين أ سيغما ب 7651 DMEM إنفيتروجين ABCD1234 FBS هيكلون SH3007.01 فارز الخلايا الانصهارية FACSAria دينار بحريني 656700 الجيلاتين MilliporeSigma جي 9391 GeneJammer رشيق هاتف: 204130 HLA-A201-HBs183-91-PE خماسي Proimmune F027-4A - 27 الجسم المضاد الثانوي المضاد للفأر HRP إنفيتروجين أ 27025 إم فلت-3 لتر بيبروتك 250-31 لتر [مل-7] بيبروتك 217-17 نوكليز S7 روش 10107921001 بارافورمالدهيد MilliporeSigma P6148-500G تحذير: مسببات الحساسية ، مسرطنة ، سامة المخزن المؤقت للنفاذية بيوليجند 421002 بوليبرين MilliporeSigma 107689 حامل ProLong™ Gold المضاد للبهتان مع DAPI إنفيتروجين ص36931 QIAamp MinElute Virus Spin Kit كياجين 57704

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hepatitis B VirusViral Antigen Specific T CellsiPSC Derived CD8 T CellsHydrodynamic Plasmid DeliveryHBV Genome PlasmidsTail Vein InjectionAntigen Presenting MoleculesCytotoxic Molecule ReleaseHBV Infected Liver CellsViral Replication Suppression

Related Articles