تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. التحضير الجراحي والتخدير ونظام التسكين
- ضع ستارة معقمة يمكن التخلص منها (45.7 سم × 66 سم) على المنصة الجراحية. أمسك بالفأر برفق ، وحقن الكيتامين (50 مجم / كغ) والزيلازين (10 مجم / كغ) داخل الصفاق (IP) للتخدير ، وحقن 0.05 مجم / كجم بوبرينورفين تحت الجلد للتسكين.
- تأكد من عمق التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم ، وحلق الشعر في منطقة البطن بأكملها باستخدام ماكينة حلاقة وضع الماوس على المنصة الجراحية المعقمة تحت مجهر التشغيل بتكبير 6-10x.
< p class = "jove_title" >
2. حصاد الطحال المتبرع
- قم بتعقيم البطن باستخدام وسادة تحضير الكحول ، وقم بتأمين الأطراف بشريط جراحي ، وقم بعمل شق جلدي عمودي خط الوسط 3-4 سم من العانة إلى عملية الخنجري بالمقص.
- اسحب جدار البطن باستخدام مباعدات معقمة مصنوعة من مشابك الورق. حرك الأمعاء إلى الجانب الأيمن من البطن (الجانب الأيسر للجراح) باستخدام قطعة قطن معقمة لكشف الطحال. كي الوريد المعدي القصير المتصل بالطحال باستخدام كي معقم بدرجة حرارة منخفضة (الشكل 1 أ). ضع قطعة من الشاش المعقم مبللة بمحلول ملحي 37 درجة مئوية فوق الطحال للحفاظ على رطوبته (الشكل 1 ب).
- افصل وقم بتعبئة الوريد البابي من أنسجة البنكرياس (الشكل 1C) عن طريق ربط فروع الوريد البابي (الوريد البنكرياس والاثني عشر العلوي والوريد المعدي الأيمن) ؛ ضع خياطة حول الوريد البابي البعيد عن الوريد الطحالي (الشكل 1 د).
- اقلب الطحال إلى الجانب الأيمن لكشف الشريان الأورطي والجذع البطني بالشريان الطحال (الشكل 1E). تشريح وتعبئة الشريان الأبهري والاضطرابات الهضمية والطحال عن طريق ربط الشريان الكبدي والشريان المعدي. ضع خياطة حول الشريان الأورطي القريب من الشريان البطني (الشكل 1F-G).
- حقن 100 وحدة دولية (IU) الهيبارين في الوريد الأجوف السفلي (IVC) لهيبارين الجسم كله وانتظر 3 دقائق للتأكد من أن الهيبارين يأخذ تأثيرات. اربط الشريان الأورطي القريب من الشريان البطني ، وقم بتمرير الوريد البابي ، ثم قم بتفريخ الجسم كله باستخدام 10 مل من البرد الهيباري (4 درجات مئوية) المحلول الملحي (10 مل / 20 ثانية) من الشريان الأورطي البطني البعيد إلى الجذع البطني (الشكل 1H).
- اجمع طعم الطحال في كتلة مع الجزء المرتبط بالأبهر والاضطرابات الهضمية والطحال والوريد البابي جنبا إلى جنب مع جزء من الوريد الطحالي وجزء صغير من أنسجة البنكرياس. يحفظ الكسب غير المشروع في 5 مل من محلول ملحي 4 درجات مئوية قبل الزرع. القتل الرحيم للفأر عن طريق خلع عنق الرحم.
< p class = "jove_title" >
3. استئصال الطحال المتلقي وزرع طعم الطحال
- ضع وسادة تدفئة على المنصة الجراحية واضبط درجة الحرارة على 37 درجة مئوية. ضع ستارة معقمة (45.7 سم × 66 سم) أعلى وسادة التدفئة لإنشاء منصة جراحية معقمة. كرر الخطوتين 2.1 و 2.2 للتحضير الجراحي والتخدير. قم بعمل شق خط الوسط بطول 3-4 سم وسحب جدار البطن كما هو موضح في الخطوة 2.1 والخطوة 2.2.
- حرك الأمعاء بحذر إلى الجانب الأيمن من الفأر باستخدام قطعة قطن معقمة لكشف طحال المتلقي. اربط الوريد الطحالي والشريان وإزالة الطحال.
- حرك الأمعاء بحذر إلى الجانب الأيسر من الفأر وقم بتغطية الأمعاء بشاش مبلل (مبلل بمحلول ملحي معقم 37 درجة مئوية). تشريح وربط الفروع القطنية للشريان الأورطي تحت الكلوي و IVC ؛ قم بتثبيت الشريان الأورطي تحت الكلوي و IVC باستخدام مشابك الأوعية الدموية الدقيقة مقاس 4 مم.
- ضع خياطة نايلون 11-0 من خلال الشريان الأورطي تحت الكلوي (سمك كامل) وتراجعها لإنشاء بضع الأبهر الإهليلجي عن طريق قطع واحد باستخدام مقص دقيق (يجب أن يتطابق الطول مع قطر الشريان الأورطي المتبرع ، الشكل 2 أ). اثقب IVC باستخدام إبرة 30 جم لإنشاء بضع الوريد الإهليلجي وتمديد الفتحة إلى طول الوريد المتطابق مع بوابة المتبرع باستخدام مقص دقيق (الشكل 2 أ).
- قم بتنظيف الدم داخل اللمعة أو الجلطة الدموية (في الشريان الأورطي و IVC) باستخدام 500 ميكرولتر من محلول ملحي هيبارين (10 وحدات / مل).
- ضع طعم الطحال في الجانب الأيمن من بطن الفأر المتلقي ؛ حدد بعناية الكفة الأبهرية للمتبرع والوريد البابي للمتبرع. بعد التأكد من عدم التواء الأوعية ، قم بتغطية طعم الطحال بشاش مبلل بالمحلول الملحي البارد (4 درجات مئوية).
- قم بتوصيل الكفة الأبهرية للمتبرع بالقمة القريبة والبعيدة من بضع الشريان الأورطي للمتلقي بخرزتين للبقاء (خياطة نايلون 11-0 ، كما هو موضح أدناه) (الشكل 2 ب ، ج). قم بعمل مفاغرة ب 2-3 لدغات من خيوط نايلون مستمرة 11-0 بين الكفة الأبهرية للمتبرع وبضع الشريان الأورطي للمتلقي (الجدار الأمامي) (الشكل 2 د). اقلب طعم الطحال إلى الجانب الأيسر من المتلقي ؛ قم بعمل مفاغرة بين الكفة الأبهرية للمتبرع وبضع الشريان الأورطي للمتلقي (الجدار الخلفي) (الشكل 2E).
- قم بإجراء مفاغرة لتوصيل الوريد البابي للمتبرع بالجدار الخلفي لIVC للمتلقي ، باستخدام 4 إلى 5 لدغات من الغرز المستمرة داخل IVC ثم إغلاق الخيط الموجود على السطح الخارجي ل IVC (الشكل 2F ، G).
- حرر مشابك الوعاء واستخدم قطعة قطن معقمة للنزيف حتى يتم استرداد لون الطحال (الشكل 2H).
- أغلق البطن بخيطة فيكريل اصطناعية قابلة للامتصاص 5-0 بنمط مستمر. أغلق طبقة الجلد بخياطة نايلون 5-0 بنمط متقطع.
ملاحظه: بالنسبة للخطوتين 3.7-3.8 ، بدلا من ذلك ، قم بإجراء مفاغرة بين وريد بوابة المتبرع و IVC للمتلقي أولا (الخطوة 3.8) ؛ ثم قم بعمل مفاغرة بين الكفة الأبهرية للمتبرع والجدار الخلفي لبضع الشريان الأورطي للمتلقي ، باستخدام 2 إلى 3 خيوط مستمرة في داخل الشريان الأورطي وأغلق الخيط على السطح الخارجي للشريان الأورطي.
< ص الفئة = "jove_title" >
4. استعادة
- حقن 1 مل من المحلول الملحي الدافئ تحت الجلد عبر 4 مواقع منفصلة (0.25 مل / موضع) بعد إغلاق البطن.
- احتفظ بالماوس في حاضنة يتم التحكم في درجة حرارتها (30 درجة مئوية) في الساعات القليلة الأولى بعد التشغيل ، وراقب الماوس حتى يستعيد وعيه الكافي ، ثم انقل الماوس إلى قفص نظيف جديد به طعام وماء عادي ، مع وسادة تدفئة (30 درجة مئوية) أسفل القفص. احتفظ بالفأر بعد الجراحة في قفص منفصل.
< p class = "jove_title" >
5. إدارة الألم بعد الجراحة
- حقن 0.05 ملغم/كغ بوبرينورفين تحت الجلد 24 ساعة و 48 ساعة بعد الجراحة للحفاظ على نظام التسكين.
