Method Article

تنقية الجسيمات النانوية البروتينية ذاتية التجميع باستخدام كروماتوغرافيا التقارب

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Karch، C.P. et al.، إنتاج جسيمات البروتين ذاتية التجميع المعبر عنها بالإشريكية القولونية للقاحات التي تتطلب عرضا للحاتمة الثلاثية.J. Vis. Exp. (2019)

يعرض هذا الفيديو تنقية الجسيمات النانوية البروتينية ذاتية التجميع أو SAPNs التي تحمل علامة الهيستيدين باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة المتقاربة. تعتبر أجزاء SAPN المنقاة الناتجة مناسبة لتطوير اللقاح ، مما يبشر بتطبيقات العلاج المناعي المحتملة.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. التعبير عن قلب الجسيمات النانوية البروتينية ذاتية التجميع التي تحتوي على بروتين من ستة حلزون (SHB-SAPN) في بكتريا قولونية BL21 (DE3)

  1. امزج 95 مل من المكون A و 5 مل من المكون B من الوسائط في قارورة Erlenmeyer زجاجية معقمة سعة 2 لتر وفقا لتعليمات الشركة المصنعة (انظر جدول المواد). أضف الأمبيسلين إلى التركيز النهائي البالغ 100 ميكروغرام/مل.
  2. تلقيح الوسائط بالإشريكية القولونية من ثقافة مخزون الجلسرين التي تم إنشاؤها مسبقا. احتضان الثقافة عند 30 درجة مئوية مع الرج عند 200 دورة في الدقيقة (دورة في الدقيقة) لمدة 48 ساعة < / > ملاحظة: يحتوي مخزون الإشريكية القولونية BL21 ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments 2-بروبانول صياد BP26181 4 لتر أمبيسلين صياد بي ت 1760-25 25 جرام Corning فلتر فراغ يمكن التخلص منه / أنظمة التخزين صياد 09-761-108 مجموعة متنوعة من الأحجام GE Healthcare 5 مل HisTrap HP أعمدة معبأة مسبقا جنرال إلكتريك للرعاية الصحية 45-000-325 5 عبوات الجلسرين صياد ص229-4 4 لتر إيميدازول صياد O3196-500 500 جرام ماجيك ميديا إي قولونية التعبير الوسيط ثيرموفيشر ك 6803 1 لتر MilliporeSigma Millex حقنة معقمة 0.22 مم فلاتر ميليبور SLGV033RB 250 قطعة طلقة واحدة BL21 Star (DE3) بكتريا قولونية مختصة كيميائيا ثيرموفيشر C601003 20 قارورة فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة صياد بي ت 329-500 500 جرام قاعدة تريس صياد ص ب 152-1 1 كجم يوريا صياد ص ب 169-500 2.5 كجم معدات Fiberlite F14-14 × 50cy دوار بزاوية ثابتة ثيرموفيشر 096-145075 الدوار نظام الكروماتوغرافيا NGC Quest 10 بيورراد 7880001 FPLC للمساعدة في تنقية البروتين سونيفر 450 برانسون المعروف أيضا باسم 096-145075 سونيكاتور

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Self Assembling Protein NanoparticlesAffinity ChromatographyHis Tag PurificationFPLC SystemImidazole ElutionProtein Nanoparticle PurificationNickel Affinity ColumnBacterial Lysate ProcessingVaccine DevelopmentImmunotherapeutic Applications

Related Articles