إنشاء تكوين خلية كاملة لتصوير الكالسيوم ثنائي الفوتون لشرائح الدماغ

الملخص

المصدر: Camiré, O., et al. تصوير الكالسيوم ثنائي الفوتون في التشعبات العصبية في شرائح الدماغ. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لتسجيل مشبك التصحيح للخلية بأكملها وتصوير الكالسيوم ثنائي الفوتون في شرائح الحصين في الدماغ. تسمح هذه الطريقة بدراسة ديناميكيات الكاسيفورم²⁺ العابرين (CaTs) في التشعبات من أنواع الخلايا العصبية المختلفة في شرائح الدماغ الحادة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل المراجعة الأخلاقية المناسبة للحيوانات.

< ص الفئة = "jove_title" >1. التحضير الأولي (اختياري: الاستعداد قبل يوم واحد)

1. تحضير ثلاثة أنواع من محلول السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي (المحاليل العادية والسكروز والتعافي ، 1 لتر لكل منهما ؛ انظر الجدول 1). اضبط أسمولية المحاليل على 300 ± 10 مللي أسم وتبريد ACSF-Sucrose وصولا إلى نقطة تجمد قريبة (0-4 درجة مئوية).
   ملاحظه: يساعد استخدام محلول القطع منخفض الصوديوم (ACSF-Sucrose) في الحفاظ على صلاحية الخلايا العصبية في الطبقات السطحية للشرائح الحادة.
2. قم بإعداد 0.75 مل من محلول التصح....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات سلالة: Mouse CD1 نهر تشارلز 22 كلوريد الكالسيوم سيجما ألدريتش سي 4901 د- (+) - جلوكوز سيجما ألدريتش G8270 هيبس سيجما ألدريتش إتش 3375 كلوريد المغنيسيوم سيجما ألدريتش M8266 كبريتات المغنيسيوم هيبتاهيدرات سيجما ألدريتش 230391 مسحوق بارافورمالدهايد ، 95٪ سيجما ألدريتش 158127 كلوريد البوتاسيوم سيجما ألدريتش ص 3911 غلوكونات البوتاسيوم سيجما ألدريتش ص 1847 أزيد الصوديوم سيجما ألدريتش S2002 بيكربونات الصوديوم سيجما ألدريتش S8875 كلوريد الصوديوم سيجما ألدريتش S5886 سكروز سيجما ألدريتش S9378 تريتون X-100 سيجما ألدريتش تي 9284 قاعدة Trizma سيجما ألدريتش [ت1503] تريزما هيدروكلوريد سيجما ألدريتش تي 3253 ثنائي هيدرات فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة سيجما ألدريتش 71643 فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة
مونوهيدرات سيجما ألدريتش إس 9638 بيوسيتين سيجما ألدريتش ب 4261 أليكسا فلور 594 هيدرازيد ثيرموفيشر العلمي أ 10438 SR95531 (غابازين) أبكام أب120042 أدينوسين ثلاثي الفوسفات (ATP) - تريس سيجما ألدريتش أ 9062 غوانوزين (GTP) - Na + سيجما ألدريتش G8877 أوريغون جرين بابتا -1 ثيرموفيشر العلمي O6812 ملح فوسفوكرياتين دي (تريس) سيجما ألدريتش ص 1937 Alexa-546 المترافق مع الستربتافيدين ثيرموفيشر العلمي س 11225 تصحيح الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكات أدوات الدقة العالمية 1ب 100 إف -4 الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكات ثيتا أداة سوتر BT-150-10 P-97 مجتذب الماصات الدقيقة المشتعلة / البني أداة سوتر TCS SP5 مجهر متعدد الفوتون متحد البؤر لايكا مايكروسيستمز Chameleon Ultra II Ti: ليزر متعدد الفوتون من الياقوت متماسك برنامج الحصول على التصوير بالتركيز البؤري التلقائي LAS لايكا مايكروسيستمز جهاز التحكم في درجة الحرارة TC-324B وارنر إنسترومنتس مكبر للصوت MultiClamp 700B الأجهزة الجزيئية محول رقمي Digidata 1440A الأجهزة الجزيئية مترجم متحد البؤر سيسكيو معالج دقيق سيسكيو برنامج الحصول على البيانات pClamp الأجهزة الجزيئية A365 عازل تحفيز التيار المستمر أدوات الدقة العالمية الجدول البصري الاهتزازي الأنظمة الحركية