$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
قياس فسيولوجيا المشبك الحي باستخدام مصفوفات متعددة الأقطاب الكهربائية (MEAs)
< p class = "jove_title" >
1. تحضير MEAs لزراعة الخلايا.
- نظف سطح كل MEA ب 1 مل من المنظفات لمدة 1 ساعة. اشطفها بالماء المعقم منزوع الأيونات (DI) ، واشطفها ب 70٪ من الإيثانول للتعقيم ، ثم جففها في الهواء في خزانة السلامة الحيوية تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية.
ملاحظه: يمكن تخزين MEAs في ماء DI عند 4 درجات مئوية في ظروف معقمة حتى الاستخدام.
- تحضير محلول 0.5 مجم / مل من بولي أورنيثين (PLO) عن طريق إذابة 50 مجم من PLO إلى 100 مل من محلول حمض البوريك. قم بتغطية سطح كل MEA ب 1 مل من PLO لجعله محبا للماء واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات على الأقل. قم بإزالة PLO وغسل السطح بماء DI.
- تمييع محلول طلاء المصفوفة خارج الخلية (ECM) مع الوسائط القاعدية (DMEM / F12) لتحضير محلول مخزون 1 مجم / مل. للحصول على حل عملي، أعد تعليق 3 مل من مخزون ECM إلى 33 مل من وسائط DMEM/F12 المبردة مسبقا، ليصل الحجم الإجمالي إلى 36 مل بتركيز 80 ميكروغرام/مل.
- أضف 1 مل من محلول عمل ECM إلى كل MEA واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات على الأقل.
- قم بإزالة وحدة التحكم في المحرك (ECM) وضع الكرات في 1.5 مل من الوسائط على سطح MEA ، مع التأكد من وضع الكرات أعلى مصفوفة الأقطاب الكهربائية (الأشكال 1A ، 1A'). اسمح لوسائل الإعلام بالالتصاق لمدة يومين. قم بتغيير نصف الوسائط كل 2-3 أيام (أو أكثر إذا لزم الأمر) ، مما يضمن عدم إزعاج المجالات.
ملاحظه: قد تؤدي إضافة عوامل النمو إلى تحسين بقاء الثقافة ونضجها.
< p class = "jove_title" >
2. قياس النشاط الكهربائي للمجالات العصبية.
- قم بإعداد نظام مصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية (MEA) مع منصة رأس يتم التحكم في درجة حرارتها. قم بإنشاء برنامج باستخدام مرشح تمرير عالي 5 هرتز ، ومرشح تمرير منخفض 200 هرتز ، وعتبة ارتفاع تبلغ 5x الانحراف المعياري (SD).
- ضع MEA على المسرح وسجل النشاط الكهربائي التلقائي (الشكل 1 ب ، ب). احفظ البيانات الأولية ، بما في ذلك تردد الارتفاع والسعة ، للتحليل الإحصائي.
ملاحظه: يمكن استخدام نظام التروية مع MEA لإضافة عوامل دوائية أو لزيادة تدفق الوسائط الجديدة للتسجيل طويل الأجل. حسب الرغبة ، يمكن إجراء معالجة لاحقة إضافية للمسامير.
