مقالة منهجية

تسجيل النشاط العصبي لأنسجة الحصين غير المطوية باستخدام مصفوفة الأقطاب الكهربية الدقيقة المخترقة

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Zhang, M., et al. انتشار النشاط العصبي في مستحضر الحصين غير المطوي مع مجموعة قطب كهربائي صغير مخترقة. J. Vis. Exp. (2015).

يوضح هذا الفيديو إجراء إعداد غرفة تسجيل مع مصفوفة أقطاب كهربائية دقيقة مخترقة (PMEA) لالتقاط الإشارات العصبية من الحصين غير المطوي. تسمح لنا هذه الطريقة بدراسة سرعة واتجاه انتشار النشاط العصبي داخل الحصين المكشوف في المختبر.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل المراجعة الأخلاقية المناسبة للحيوانات.

1. حلول للجراحة والتسجيل التجريبي

  1. تحضير عازلة طبيعية للسائل الدماغي النخاعي الاصطناعي (aCSF) تحتوي على (ملليمتر) كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) 124 ، KCl (كلوريد البوتاسيوم) 3.75 ، KH2PO4 (فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيوم) 1.25 ، MgSO4 (كبريتات المغنيسيوم) 2 ، NaHCO3 (بيكربونات الصوديوم) 26 ، سكر العنب 10 ، وكلور الكالسيوم2 (كلوريد الكالسيوم) 2. استخدم هذا aCSF العادي لاستعادة الأنسجة بعد التشريح ولنظام الغسيل في بداية التجربة.
  2. تحضير السكروز aCSF المستخدم أثناء تشريح الحصين ويحتوي على (مللي مولار): السكروز 220 ، KCl 2.95 ، NaH2PO4 (فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم) 1.3 ، MgSO4 2 ، NaHCO3 26 ، سكر العنب 10 ، وكلورالكالسيوم 2 2. من أجل تحفيز نشاط الصرع في تحضير أنسجة الحصين السليمة ، أضف 4-Aminopyridine (4-AP) إلى aCSF الطبيعي بتركيز 100 ميكرومتر.
< p class = "jove_title" >2. وضع الحصين غير المطوي على مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة المخترقة (PMEA) لتسجيل النشاط العصبي

  1. لتحضير الإعداد التجريبي ، املأ زجاجة واحدة ب aCSF العادي وزجاجة أخرى ب 4-AP aCSF. في كلتا الزجاجتين ، قم بفقاعة 95٪ O2 / 5٪ CO2 من بداية كل تجربة. استخدم موصل ثلاثي الصمامات للتحكم في الحل الذي سيتم اختياره أثناء التجربة. قم بتوصيل أنبوب مفرغ عند مخرج الغرفة لضخ المحلول في حاوية الغبار. قم بتسخين خط الأنابيب قبل تسليمه إلى غرفة التسجيل واحتفظ بالمحلول عند مستوى درجة حرارة متحكم فيه (35 درجة مئوية).
  2. عند إغلاق مدخل ومخرج غرفة التسجيل ، استخدم قطارة ماصة زجاجية مصنوعة خصيصا لنقل الحصين غير المطوي ووضعه في الغرفة. تحت المجهر ، ضع الحصين المكشوف باستخدام فرشاة طلاء صغيرة عادية بينما يطفو النسيج في المحلول. ضع الحصين المكشوف بحيث يكون جانبه الحويقي متجها لأسفل ، ومنطقة CA3 تشير بعيدا ، ويشير حقل CA1 إلى الباحث.
  3. امتصاص المحلول في الغرفة بعناية باستخدام ماصة مفرغة من حافة غرفة التسجيل لخفض مستوى المحلول حتى تجف الغرفة ويتم إنزال الأنسجة على المصفوفة. بعد ذلك ، ضع بعناية مرساة أنسجة مخصصة (الشكل 1) (رقم 7 في مواد ومعدات محددة) أعلى الأنسجة لتثبيت الحصين غير المطوي على المصفوفة. ضع بضع قطرات من المحلول في غرفة التسجيل لإعادة تعبئتها ، وافتح المدخل والمخرج تدريجيا لضبط معدل التدفق إلى حوالي قطرتين في الثانية في غرفة التنقيط الوريدي.
  4. احتضان الأنسجة في غرفة التسجيل باستخدام aCSF العادي لمدة 1 دقيقة تقريبا للتعافي ، ثم قم بتبديل إمداد المحلول إلى aCSF المذاب 4-AP واضبط معدل التدفق بشكل صحيح. احتضان الأنسجة في 4-AP aCSF المذاب لمدة 5 إلى 10 دقائق ، وبعد ذلك يمكن للباحث بدء تشغيل البرنامج لتسجيل الإشارة عند ظهور نشاط تلقائي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1. الإعداد التجريبي. (أ) يتم وضع غطاء بلاستيكي بمسامير فوق الدوائر لحمايته من التلف المحتمل بالمياه. تحتوي غرفة التسجيل على أنابيب مدخل ومخرج لحمل تدفق المحلول. يتم استخدام مرساة مناديل مصنوعة حسب الطلب ملصقة بشبكة من ألياف النايلون لتأمين الأنسجة أثناء التجارب. (ب) صورة مأخوذة من أسفل الركيزة الزجاجية ل PMEA تظهر مرساة الأنسجة التي تحمل شريحة عينة أثناء التجربة. ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات فرشاة طلاء صغيرة لويز درجة حرارة #: 105657 نموذج #: 90219 الشخص الذي يحتوي على أصغر حجم في عبوة فرشاة الطلاء العادية أداة مساعدة الزجاج المصقول للحريق غير متاح غير متاح كانت هذه الأداة مصقولة بالنار ومصنوعة من ماصات زجاجية من باستور العادية. إبرة زجاجية مصنوعة حسب الطلب غير متاح غير متاح كانت هذه الأداة مصقولة بالنار ومصنوعة من ماصات زجاجية من باستور العادية. أداة زجاجية مصنوعة حسب الطلب مع حلقة سلكية معدنية غير متاح غير متاح كانت هذه الأداة مصقولة بالنار ومصنوعة من ماصات زجاجية من باستور العادية مع حلقة سلكية معدنية معاد تشكيلها. قطارة محلول زجاجي مخصصة غير متاح غير متاح صنعت هذه الأداة من ماصات زجاجية من باستور العادية مع قطع أطرافها ورأس مطاطي متصل بالطرف المقطوع. مرساة الأنسجة حسب الطلب غير متاح غير متاح تم لصق شبكة ألياف النايلون على حلقة أسلاك نحاسية معزولة. تم الاحتفاظ بمرساة الأنسجة بواسطة معالج دقيق. مصفوفة أقطاب كهربائية دقيقة ملفقة حسب الطلب غير متاح غير متاح مزيد من التفاصيل حول المصفوفة يرجى الرجوع إلى Kibler، et al، 2011. دوائر مرشح ومكبرات صوت مخصصة للمصفوفة غير متاح غير متاح مزيد من التفاصيل حول المصفوفة يرجى الرجوع إلى Kibler، et al، 2011. معالج الحصول على البيانات 3400a مختبرات ميكروستار غير متاح هذا نظام كامل للحصول على البيانات مع محول A / D.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

4

مقالات ذات صلة