إحداث الدوالي المحورية مع حافز ميكانيكي دقيق على الخلايا العصبية

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Servello، D.، et al. نظام ميكانيكي ميكروبيولوجي لدراسة تكوين الدوالي والتعافي في محاور الخلايا العصبية المركزية. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو تحريض الدوالي المحورية عن طريق تطبيق التحفيز الميكانيكي الدقيق على الخلايا العصبية. يتكون النظام من ماصة دقيقة متصلة بحقنة تحتوي على عازلة عبر الأنابيب. باستخدام معالج دقيق ، يتم وضع الماصة الدقيقة فوق الخلايا العصبية. ثم يتم تطبيق ضغط السوائل للحث على الدوالي في المحاور.

البروتوكول

1. إعداد جهاز ماصة النفخ

ملاحظة: هناك خمسة مكونات أساسية لهذا الإعداد: الماصة الزجاجية ، والأنبوب ، والحقنة ، ومعالج الدقيق ، والمخزن المؤقت (هانك) الجدول 1. يمكن استخدام أي مخزن مؤقت يحتوي على تركيزات ملح ذات صلة من الناحية الفسيولوجية في هذا الإعداد.

1. اسحب ماصة البورسليكات بحيث يكون لها طرف فتح بقطر 45 ميكرومتر تقريبا باستخدام مجتذب ماصة دقيقة والمواصفات الواردة في الجدول 2.
   ملاحظة: وجد أن 45 ميكرومتر هو حجم مناسب لقطر فتحة الماصة في ظل الظروف التجريبية. يجب ألا تؤثر الاختلافات الطفيفة في حجم الفتحة بشكل كبير على النتائج. من المهم ملاحظة أن المغادر....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: تخطيطي وصورة لجهاز النفخ. (أ) صور توضح الإعداد العام للمجهر. (ب) جهاز النفخ الذي يظهر الماصة الزجاجية التي يحملها المعالج الدقيق والمتصلة بالأنبوب المطاطي. (ج) صور تباين الطور مع التركيز على مستوى الخلايا العصبية الأولية للحصين التي تظهر ظل الماصة في أسفل اليمين. (د) يركز المستوى خارج الخلية على طرف الماصة المنتفخة. (ه) تخطيطي للمسافات والضغوط المحسوبة لإحداث الدوالي. شريط المقياس.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أنابيب أوبر فيشر ساينتيك 14-169-1 أ حقنة بلاستيكية 10cc ومكبس بيكتون ديكنسون مناور دقيق أدوات سوتر طبق زراعة الخلية (35 مم × 10 مم) كورنينج 3294 نموذج P-1000 مجتذب الماصة الدقيقة المشتعلة / البني أدوات سوتر Eclipse TE2000-U Mcroscope نيكون خطة عدسة Fluor ELWD 20x نيكون 62933 هدف عدسة زيتية Apo TIRF 100x / 1.49 نيكون MRD01991 هدف هيبس فيشر ساينتيك BP410-500 د-الجلوكوز فيشر ساينتيك د16-500 كلوريد المغنيسيوم 2 فيشر ساينتيك بي ت 214-500 كلوريد الصوديوم فيشر ساينتيك S640-3 كيه سي إل فيشر ساينتيك BP366-500 CaCl2 فيشر ساينتيك سي 70-500