المراقبة البصرية والفيزيولوجية الكهربية المتزامنة للخلايا العصبية في شرائح الدماغ

الملخص

المصدر: Murphy، C.A.، et al. التنشيط البصري الوراثي للمسارات الواردة في شرائح الدماغ وتعديل الاستجابات عن طريق التخدير المتطاير. J. Vis. إكسب. (2020)

يوضح هذا الفيديو طريقة لتصوير وتسجيل النشاط الكهربائي في وقت واحد من شرائح الدماغ المعدلة وراثيا التي تحتوي على بروتينات فلورية خاصة بالخلايا العصبية. يتضمن الإجراء الحفاظ على شريحة الدماغ في غرفة التروية باستخدام السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي الهوائي ، واستخدام مصدر ضوء لإثارة الخلايا المسماة بالفلورسنت ، وتسجيل الإشارات الكهربائية باستخدام مسبار متعدد القنوات ومشبك رقعة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. إعداد الأجهزة والبرامج للتسجيلات متعددة القنوات

1. قم بإعداد نظام الحصول على البيانات من 16 قناة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
   ملاحظه: يمكن استخدام العديد من مكبرات الصوت وأنظمة الحصول على البيانات المتاحة تجاريا لجمع التسجيلات متعددة القنوات. في التجارب الموضحة هنا ، يتم توصيل الإشارات التناظرية عبر لوحة مرجعية للقطب الكهربائي إلى مكبرات صوت ، حيث يتم تضخيمها (2000x) وتصفيتها (0.1-10 كيلو هرتز). يتم رقمنة المدخلات التناظرية لنظام الحصول على الب....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات عدسة موضوعية عريضة المجال 2.5x أوليمبوس MPLFLN2.5 ضعف عدسة موضوعية بالغمر في الماء 40x أوليمبوس LUMPLFLN40XW خليط 95٪ O2 / 5٪ CO2 إيرغاز Z02OX95R2003045 مسبار A16 الرابطة العصبية A16x1-2 مم -100-177-A16 مسبار 16 قناة جهاز مراقبة غاز التخدير (POET II) النقد 602-3 أ كلوريد الكالسيوم (CaCl2) دوت ساينتيك DSC20010 ACSF زجاج شعري (تسجيلات مشبك التصحيح) King Precision Glass، Inc. كجم -33 البورسليكات ، ID: 1.1 مم ، OD: 1.7 مم ، الطول: 90.0 مم الزجاج الشعري (الحقن الفيروسي) شركة دروموند العلمية 3-000-203-جم / إكس 3.5 بوصة التحكم في المناولة الدقيقة المبتدئة لويغ ونيومان س8 للتحكم في المعالج الدقيق الصغير التحكم في المتلاعبين وطاولة التبديل لويغ ونيومان SM7 للتحكم في القطب متعدد القنوات وطاولة التبديل ديجي داتا 1440 أ + كلامبكس 10 الأجهزة الجزيئية 1440 أ محول الأرقام والبرمجيات أنابيب E-3603 فيشر ساينتيك 14171208 لتوصيل خليط غاز 95٪ O2 / 5٪ CO2 إلى غرفة الحضانة + تطبيق الضغط أثناء لقط التصحيح EGTA دوت ساينتيك DSE57060 حل داخل الخلايا ERP-27 EEG مرجع / لوحة التصحيح نيورالينكس متقاعد ملء إبرة أدوات الدقة العالمية 50821912 لملء ماصات المشبك التصحيح مكعب مرشح لتصوير EYFP أوليمبوس U-MRFPHQ ورق الترشيح فيشر ساينتيك 09801ه وضع فوق قالب الشريحة أثناء تحضير كتلة الأنسجة مجتذب الماصات الدقيقة المشتعلة / البني أداة سوتر ف -1000 2.5x2.5 خيوط صندوق أنبوب تشتت الغاز سيجما ألدريتش CLS3953312C حقنة زجاجية (100 مل) سيجما ألدريتش Z314390 لملء الأكياس المختومة بالغاز حمض الجلوكونيك ، ملح البوتاسيوم (K-gluconate) دوت ساينتيك DSG37020 حل داخل الخلايا الجلوكوز دوت ساينتيك DSG32040 ACSF GTP ، ملح الصوديوم سيجما ألدريتش G8877 حل داخل الخلايا محول مسبار الرأس الرابطة العصبية A16-OM16 محول لتوصيل مسبار 16 قناة بإدخال المسرح هيبس دوت ساينتيك DSH75030 ACSF ، محلول داخل الخلايا HS-16 Headstage نيورالينكس متقاعد إيزوفلوران باترسون البيطري 07-893-1389 كحول الأيزوبروبيل (70٪) VWR الدولية هاتف: 101223-746 مناور دقيق صغير لويغ ونيومان 210-100 000 0090-R للتلاعب بقطب مشبك التصحيح وحدة التحكم في مصدر ضوء LED ميغتكس BLS-PL02_US التحكم في مصدر الضوء البصري الوراثي مكبر الصوت Lynx-8 نيورالينكس متقاعد مزود الطاقة Lynx-8 نيورالينكس متقاعد كبريتات المغنيسيوم (MgSO4) دوت ساينتيك DSM24300 ACSF mCherry ، تكساس مكعب مرشح أحمر صفاء 49008 للتصوير tdTomato الفلوري المراسل ميلوكسيكام حامل الماصة الدقيقة فيشر ساينتيك NC9044962 مضخة الحقنة الدقيقة أدوات الدقة العالمية UMP3-4 MultiClamp 700A الأجهزة الجزيئية / أدوات Axon 700 أ مكبر النيتروجين (لطاولة الهواء) إيرغاز 200 ناي شبكة النايلون فيشر ساينتيك 501460083 ممتدة فوق حدوة حصان من الأسلاك البلاتينية المسطحة ، شريحة الراحة فوق هذا أثناء التسجيلات نايلون مقطوع من جوارب طويلة العلامة التجارية العامة قطعة صغيرة لإنشاء منصة شريحة في غرفة الحضانة ، ألياف مفردة لإنشاء قيثارة بلاتينية ماصه دوت ساينتيك 307 لنقل الأنسجة إلى الحفارة سلك بلاتيني VWR الدولية BT124000 2 سم ، مسطح ، لعمل القيثارة البلاتينية مضلع 400 ميغتكس DSI-E-0470-0617-000 نظام توصيل الضوء البصري الوراثي ، يأتي مع برنامج PolyScan2 كلوريد البوتاسيوم (KCl) دوت ساينتيك DSP41000 ACSF فوسفات البوتاسيوم (KH2PO4) دوت ساينتيك DSP41200 ACSF كيس غاز مختوم فيشر ساينتيك 109236 طاولة التحول للمجهر لويغ ونيومان 380FMU بيكربونات الصوديوم (HCO3-) دوت ساينتيك DSS22060 ACSF كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) دوت ساينتيك DSS23020 ACSF ، محلول داخل الخلايا حقنة (1 مل) مع طرف LuerLock فيشر ساينتيك 309628 لتطبيق الضغط أثناء لقط التصحيح حقنة (1 مل) مع طرف انزلاق دبليو دبليو غرينجر ، إنك. 19 جي 384 لملء ماصات المشبك التصحيح مرشحات الحقن VWR الدولية 66064-414 مجهر عمودي أوليمبوس BX51 مناشف ويبال فيشر ساينتيك 19-042-427