$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
فئة
1. زرع القطب الكهربائي VEP
- تخدير بحقن داخل الصفاق من الكيتامين (75 مجم / كجم) وميديتوميدين (0.5 مجم / كجم).
ملاحظه: بعد تحريض التخدير ، راقب ردود الفعل الانسحابية (اختبار القرص ، منعكس القرنية والحنف ، إلخ) وغيابها كمؤشر لبدء الجراحة. راقب باستمرار طوال الجراحة وقم بإعطاء أدوية مخدر إضافية (10٪ من جرعة الكيتامين الأولية لكل دفعة إضافية) في حالة وجود ردود الفعل. يتم استخدام الفئران البالغة (>12 أسبوعا) في التجارب.
- حلق جلد منطقة الجراحة. ضع على وسادة تدفئة (37 درجة مئوية) للحفاظ على درجة حرارة الجسم أثناء الجراحة. تحضير البشرة من خلال التطبيق الموضعي للبوفيدون واليود. ضع اللف الجراحي. ضع مرهم العين الموضعي لمنع جفاف القرنية تحت التخدير العام. الحفاظ على التعقيم باستخدام أدوات معقمة.
- قم بعمل شق طولي في الجلد على خط الوسط لجلد الرأس. قم بتنظيف النسيج الضام لتحقيق التعرض الجيد للجمجمة.
- قم بحفر ثقوب نتوءات صغيرة يدويا بعناية باستخدام مثقاب يدوي دقيق عند 7 مم خلف بريجما و 3 مم جانبيا إلى خط الوسط.
- زرع أقطاب لولبية من خلال الجمجمة إلى القشرة (المنطقة 17) ، تخترق القشرة إلى عمق 0.5 مم تقريبا. زرع قطب لولبي مرجعي على خط الوسط 3 مم منقاري إلى البريجما. ضع أسمنت الأسنان لتغليف البراغي وإصلاحها (ليس مطلوبا دائما).
- خياطة جلد الرأس ، وإعطاء مرهم المضادات الحيوية على الجلد ، والسماح للحيوان بالتعافي من التخدير على وسادة الاحترار.
ملاحظة: بدلا من ذلك، يمكن ترك الأقطاب الكهربائية مكشوفة بحيث لا تحتاج إلى إعادة فتح الجلد في كل تسجيل. مباشرة عند التوقف عن الجراحة ولكن قبل التعافي من التخدير، يتم تطبيق دواء مضاد للالتهابات غير ستيرويدي (NSAID) (إذا لم يتم إعطاؤه قبل الجراحة) أو مسكن أفيوني. راقب باستمرار حتى تتعافى تماما من التخدير وتكون متنقلة.
- اترك أسبوعا واحدا على الأقل حتى تتعافى من الجراحة قبل تسجيل VEP.
2. تسجيل VEP
- تخدير وإعداد الجلد ك 1.1 و 1.2.
ملاحظة: يمكن استخدام جرعة أقل من التخدير للتسجيل الفيزيولوجي الكهربي (الكيتامين 40 ملغ/كغ وميديتوميدين 0.25 ملغم/كغ).
- ضع الجرذ في غرفة مظلمة واتركه يتكيف مع الظلام لمدة 5 - 30 دقيقة. في بعض الحالات ، يمكن أن تكون الفئران متكيفة مع الظلام O / N للسكوتوبيك أو تتكيف مع الضوء لتسجيلات VEP الضوئية.
- حافظ على درجة حرارة الجسم عند 37 ± 0.5 درجة مئوية بواسطة نظام البطانية المتجانسة للحرارة مع مسبار مقياس حرارة المستقيم.
- قم بتوسيع حدقة العين باستخدام قطرات العين تروبيكاميد 1.0٪. افتح الجلد فوق الجمجمة للوصول إلى الأقطاب الكهربائية اللولبية الموضوعة مسبقا في الموقع.
- قم بتوصيل المسمار فوق القشرة البصرية المقابلة للعين المحفزة والمسمار المرجعي بمكبر الصوت. أدخل قطبا كهربائيا بإبرة في الذيل مثل الأرض. قم بقياس مقاومة القطب الكهربائي والحفاظ عليها أقل من 5 كيلو أوم.
- ضع محفز Ganzfeld صغير مباشرة على الجلد حول الجفون لتوفير عزل فائق للعين. يجب معايرة إضاءة المحفز مسبقا بواسطة مقياس ضوئي.
- قم بتوصيل التحفيز الضوئي من خلال ومضات الضوء 100 مرة بتردد 1 هرتز ، مع إعدادات مرشح تمرير النطاق المنخفض والعالي 1 و 100 هرتز ، على التوالي. معدل أخذ عينات الإشارة عند 5 كيلو هرتز
ملاحظة: يجب أخذ عينات من الإشارات بحوالي 250 - 300 هرتز على الأقل لضمان جمع أكثر من عينتين خلال كل دورة.
- خياطة الجلد للخلف واحتفظ بالحيوانات على وسادة الاحترار للتعافي من التخدير. يمكن تسجيل التسجيل بشكل متكرر على الفردية لمراقبة التغييرات الوظيفية على مدار فترة زمنية.