إجراء تحفيز الأعصاب الكهفية في الفئران لقياس الضغط داخل الكهف

الملخص

المصدر: Hox, M., et al. تحفيز الأعصاب الكهفية وتسجيل الضغط داخل الكهف في الفئران. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو عزل وتحفيز العصب الكهفي في فأر مخدر لدراسة تغيرات ضغط الدم في الجسم الكهفي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحضير الأنابيب والقطب الكهربائي والأدوات للإجراء الجراحي

1. استخدم أدوات الجراحة المجهرية التالية: مقص جراحي ، مقص دقيق بزاوية ، ملقط أنسجة ، زوج من ملقط دومون # 7 و # 5 المنحني ، حامل إبرة صغيرة ، ومباعدات.
   ملاحظه: هذا إجراء حاد ، لذلك لا يلزم تعقيم الأدوات. بعد الاستخدام ، نظف الأطراف وامسحها بنسبة 70٪ من الإيثانول.
2. انقع الأنبوب في 70٪ من الإيثانول ثم اغسله بكلوريد الصوديوم المعقم 0.9٪ مع 100 وحدة / مل من الهيبارين قبل الاستخدام. اترك الأنبوب ممتلئا لتجنب إدخال فقاعات الهواء في النظام.
3. قم بقص قطعة من البولي إيثيلين (PE) -50 مقاس 20-30 سم لعمل قسطرة لقياس الضغط داخل الكهف (ICP). تأكد من أن الأنبوب قصير قدر الإمكان لتقليل الضغط.
4. ثني إبرة معقمة 24G جنبا إلى جنب حتى تنكسر الإبرة في المنتصف. قم بتوصيل القطعة بالشطبة بالطرف البعيد من أنبوب PE لإدخالها في القضيب. أدخل النصف الآخر في المحور للتوصيل بمحول الضغط. املأ النظام بمحلول ملحي هيبارين (100 وحدة / مل).
5. لصنع القطب الكهربائي ثنائي القطب المطلي بالتفلون ، قم بقطع سلكين فضيين 125 ميكرومتر متساويين في الطول. استخدم قطعة من الشريط اللاصق لربط الأسلاك بحافة الطاولة وربطها معا. ثم قم بتوصيل القطب الكهربائي بلوحة سوداء.
6. قم بعمل شق صغير في التفلون واستخدم ملقط صغير # 5 لتجريد طلاء تفلون بطول 4-5 مم من أطراف الأقطاب الكهربائية. اقطع الأطراف بمشرط لتحقيق طول متساو وإنشاء خطافات عن طريق ثني الأطراف حول الحافة الحادة لشفرة المشرط.
7. قم بلصق القطب الكهربائي بحيث تمتد النهاية قليلا فوق حافة اللوحة السوداء مع توجيه الخطافات لأعلى. امزج غراء السيليكون على لوح بلاستيكي لمدة 10 ثوان ولف فقاعة الغراء حول القطب الكهربائي 1-2 مم من الخطاف.
8. اتركه ليجف لمدة 5 دقائق تقريبا قبل الاستخدام (الشكل 1). قم بتجريد التفلون من قسم أطول على الطرف الآخر للسماح بالاتصال بالمحفز.
   ملاحظه: عند إعادة عمل الخطافات الموجودة في الطرف البعيد ، يمكن إعادة استخدام القطب عدة مرات.

< ص الفئة = "jove_title" >2. تحضير

1. بعد تخدير ، احلق النصف السفلي من البطن والرقبة والعجان. افرك بالكحول بنسبة 70٪ متبوعا ببوفيدون اليود ثلاث مرات. ضع الجرذ على وسادة جراحية ساخنة في وضع ضعيف. ضع مرهم العين البيطري وقم بتبديل التخدير إلى مخروط الأنف مع 2.5٪ إيزوفلوران و 0.8 لتر / دقيقة أكسجين كحامل.
   ملاحظه: اضبط مستوى الأيزوفلوران والأكسجين لتحقيق مستوى مقبول من التخدير.

فئة < ص = "jove_title" >3. التحضير قبل الجراحة

1. قم بإجراء العملية الجراحية بأكملها تحت مجهر التشغيل: يكفي التكبير الذي يتراوح من 3.15X إلى 20X. استخدم القفازات وحافظ على بيئة نظيفة طوال الجراحة. ضع الجرذ على ثنى.

فئة

4. تشريح العضلات Ischiocavernosus لقياس برنامج المقارنات الدولية

1. استخدم مشرطا ومقصا مستقيما وملقطا صغيرا منحنيا من Dumont # 7 لعمل شق جلدي عمودي بطول 1 سم 5 مم جانبيا إلى خط الوسط بدءا من مستوى قاعدة القضيب ويمتد إلى أسفل (الشكل 2 أ). استخدم طرف Q وافصل اللفافة الجانبية بعناية عن كيس الصفن (الشكل 2 ب). بعد تشريح اللفافة ، قم بإرفاق الضاعرات والجس باستخدام مقايضة ذات رأس قطني للعثور على الحدبة الإسكية (الشكل 2 ج).
2. تشريح الأنسجة الدهنية الإنسية لهذه النقطة حتى يتم تصور العضلة الإسكية (الشكل 3 أ). استخدم زوجا من الملقط الصغير المنحني Dumont # 7 وافصل العضلات طوليا. ستظهر الغلالة البيضاء كهيكل أبيض ساطع (الشكل 3 ب). باستخدام ملقط دقيق ومقص دقيق ، قم بتعريض الغلالة البوغينيا بشكل كاف لرؤية مسارها (الشكل 3 ج).
3. بعد معايرة إعدادات النظام ، أدخل الأنبوب عبر الجلد على العجان ، وتأكد من أنه يعمل بالتوازي مع القضيب (الشكل 4). اترك الخط في مكانه وحافظ على رطوبة الشق بالمحلول الملحي.

فئة

5. تشريح CN للتحفيز

1. قم بعمل شق بطني أقل بمقدار 2 سم في خط الوسط عبر الجلد باستخدام مشرط أولا ثم مقص مستقيم وملقط دقيق. قم بعمل شق مطابق من خلال اللفافة على طول الخط الصغير والأنسجة العضلية الأساسية لكشف المثانة والبروستاتا.
2. استخدم المباعدات لتحقيق تعرض جيد. استخدم مسحات من القطن لفصل البروستاتا عن الأنسجة الدهنية للحصول على تصور واضح للعقدة الحوضية الرئيسية (MPG) والعصب الكهفي (CN) ، التي تعمل على الجانب الظهري الجانبي للبروستاتا (الشكل 5).
3. بعد تصور MPG و CN ، قم بشق اللفافة التي تغطي العصب بعناية 2-5 مم إلى MPG باستخدام مقص صغير بزاوية (الشكل 6 أ). باستخدام ملقط # 5 دقيق ، انشر الأنسجة على كل جانب من العصب وتحته لتحرير جزء طوله 4 مم (الشكل 6 ب) ، وحرك خياطة 9-0 تحت العصب (الشكل 6 ج).
4. ارفع العصب قليلا بمساعدة الخيط (الشكل 7 أ) لتسهيل وضع خطافات القطب ثنائي القطب حول العصب (الشكل 7 ب). دع المساعد يخلط غراء السيليكون المكون من عنصرين بطرف إبرة الأنسولين لمدة 5 ثوان. جفف العصب وقم بتطبيق الغراء على المنطقة المحيطة بالخطافات والعصب (الشكل 7 ج ، د). حافظ على العصب مرتفعا عن طريق سحب القطب قليلا لمدة 1 دقيقة تقريبا للسماح للغراء بالجفاف.
5. قم بإزالة الضاعرات ، باستثناء الضاعرات الموجودة على الجانب الأيمن ، لتجنب أي سحب أو التواء للقطب. بلل الأعضاء المكشوفة بالمحلول الملحي وضع الشاش المنقوع في محلول ملحي فوق الشق.

< p class = "jove_title" >6. قنية الجسم الكهفي لقياس برنامج المقارنات الدولية

1. استعادة تصور الغلالة البيضاء باستخدام الضاعرات. تأكد من عدم ربط الضواعق بالعضلة الإسكيوكافيرنوسوسية لأنها ستشوه الصلب.
2. قم بتوصيل الإبرة واغسل الأنبوب بمحلول ملحي هيباريني قبل إدخاله في الغلالة البيضاء. حافظ على الغلالة البيضاء مشدودة ، باستخدام ملقط دقيق منحني Dumont # 7 بيد واحدة (غير مهيمن) ، ممسكا الغلالة البيضاء وبقية العضلات البعيدة إلى نقطة الإدخال. أمسك الإبرة بالملقط الدقيق المستقيم في اليد المهيمنة الأخرى وأدخلها بالتوازي مع مسار الجسم الكهفي (الشكل 8).
3. ادفع الإبرة 5-8 مم في الجسم الكهفي. اغسل الأنبوب واضغط على الأنبوب لاختبار الخط (الشكل 9). تأكد من عدم وجود تسريبات. اربط الأنبوب بالطاولة بشريط لاصق لمنع السحب العرضي للخط. قم بإزالة المباعدات.

< ص الفئة = "jove_title" >7. تحفيز CN

1. عند تشغيل برنامج التسجيل (على سبيل المثال ، Spike 2) ، قم باستمرار بتسجيل الضغط الشرياني داخل الكهف ومتوسط الضغط الشرياني
2. اضبط المعلمات التالية على المحفز (على سبيل المثال ، SD9 Grass Instruments ، انظر جدول المواد) لتحفيز CN: التيار عند 1.5 مللي أمبير ، والتردد عند 16 هرتز ، والجهد عند 3 فولت ، وعرض النبضة عند 5 مللي ثانية. قم بتطبيق 50 ثانية من التحفيز مع ما لا يقل عن 1 دقيقة من الراحة بين التحفيزات.
   ملاحظه: عادة ما تؤدي المحفزات الأولى إلى تناقص الاستجابة (الشكل 10).

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1. القطب الفضي المطلي بالتفلون ثنائي القطب. (أ) فقاعة الغراء في المنطقة الانتقالية بين القطب المطلي وغير المطلي. (ب) بعيد 2 سم من القطب مشدود بإحكام. (ج) خطافات متوازية غير مطلية على بعد 1 مم.

الشكل 2. تشريح الجسم الكهفي - المعالم. (أ)...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ملقط Adson أداة العلوم الدقيقة 11006-12 ملقط دومون # 7 أداة العلوم الدقيقة 11271-30 ملقط دومون # 5 أداة العلوم الدقيقة 11273-20 مقص المايونيز ToughCut أداة العلوم الدقيقة 14110-15 مقص زنبركي Vannas مصغر أداة العلوم الدقيقة 15006-09 الترا فاين هيموسات أداة العلوم الدقيقة 13020-12 كريل هيموستات أداة العلوم الدقيقة 13004-14 لاصق Kwik-Sil أدوات الدقة العالمية كويك سيل سلك فضي مطلي بالتفلون 0.125 مم أدوات الدقة العالمية AGT0510 مباعرات الأسلاك المرنة حسب الطلب شفرة مشرط أداة العلوم الدقيقة 10023-00 أنابيب PE-50 وارنر إنسترومنتس 64-0753 23 جرام إبرة كروس 121272 SD-9 محفز النبض المربع سوماتكو 1077/183 محول ضغط الدم والكابل أدوات الدقة العالمية BLPR2 Raucotupf أدوات تطبيق قطنية لومان راوتشر 11966 العصي العينية المؤيدة للأوفتا لومان راوتشر 16515 م كلوريد الصوديوم 0.9٪ 100 مل صيدلية محلية الهيبارين صيدلية محلية 25 مل حقنة مستشفى جامعة أودنسي مرهم العين البيطري - Viscotears صيدلية محلية الأسلاك الفضية Science Products GmbH ، هايدلبرغ ، ألمانيا غراء السيليكون Kwik-Sil ، الأدوات الدقيقة العالمية ، ساراسوتا ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية