تسجيل مشبك رقعة الخلية الكاملة في خلية عصبية جيلاتينية جوهرية لشريحة من الحبل الشوكي

الملخص

المصدر: Zhu, M., et al. تحضير شرائح الحبل الشوكي الحادة لتسجيل مشبك التصحيح للخلية الكاملة في الخلايا العصبية الجيلاتينية. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو إجراء إجراء التسجيلات الفيزيولوجية الكهربية في الخلايا العصبية الجوهرية الجيلاتينوزا (SG) لشرائح الحبل الشوكي ، باستخدام تقنيات مشبك التصحيح للخلية الكاملة لتحليل أنماط إطلاق الخلايا العصبية. تسمح هذه الطريقة بدراسة الاستجابات العصبية للمنبهات في الخلايا العصبية SG للحبل الشوكي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل المراجعة الأخلاقية المناسبة للحيوانات.

< p class = "jove_title" >1. تحضير الحلول والمواد

1. محاليل
   1. تحضير السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي (ACSF) (بالملليمتر): 117 كلوريد الصوديوم (NaCl) ، 3.6 كلوريد البوتاسيوم (KCl) ، 1.2 ثنائي هيدرات فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم (NaH₂PO₄ · 2 H₂O) ، 2.5 ثنائي هيدرات كلوريد الكالسيوم (CaCl₂ · 2 H₂O) ، 1.2 سداسي هيدرات كلوريد المغنيسيوم (MgCl₂ · 6 H₂O) ، 25 بيكربونات الصوديوم (NaHCO₃) ، 11 د جلوكوز ، 0.4 حمض ....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات كلوريد الصوديوم سيغما إس 7653 تستخدم لإعداد ACSF و PBS كيه سي إل سيغما 60130 تستخدم لتحضير محلول داخل الخلايا القائم على ACSF و sukrose-ACSF و K + NaH2PO4 · 2H2O سيغما 71500 تستخدم لتحضير ACSF و sucrose-ACSF و PBS CaCl2 · 2H2O سيغما سي 5080 تستخدم لتحضير ACSF والسكروز-ACSF MgCl2 · 6 ساعة 2 سيغما M2670 تستخدم لتحضير ACSF والسكروز-ACSF NaHCO3 سيغما الطراز S5761 تستخدم لتحضير ACSF والسكروز-ACSF د-جلوكوز سيغما جي 7021 تستخدم لإعداد ACSF حمض الأسكوربيك سيغما ص 5280 تستخدم لتحضير ACSF والسكروز-ACSF بيروفات الصوديوم سيغما أ 7631 تستخدم لتحضير ACSF والسكروز-ACSF سكروز سيغما إس 7903 تستخدم لتحضير السكروز-ACSF ك-غلوكونات واكو 169-11835 تستخدم لتحضير محلول داخل الخلايا القائم على K + Na2-فوسفوكرياتين سيغما ص 1937 تستخدم لإعداد محلول داخل الخلايا EGTA سيغما E3889 تستخدم لإعداد محلول داخل الخلايا هيبس سيغما إتش 4034 تستخدم لإعداد محلول داخل الخلايا مجم - ATP سيغما أ 9187 تستخدم لإعداد محلول داخل الخلايا ليثيوم جي تي بي سيغما جي 5884 تستخدم لإعداد محلول داخل الخلايا سي إس ميزو 4 سيغما ج1426 تستخدم لتحضير محلول داخل الخلايا القائم على Cs + سي إس إل سيغما سي 3011 تستخدم لتحضير محلول داخل الخلايا القائم على Cs + شاي-كلوريد سيغما تي 2265 تستخدم لتحضير محلول داخل الخلايا القائم على Cs + Na2HPO4 الكواشف الكيميائية Hengxing تستخدم لإعداد PBS الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكات أدوات الدقة العالمية TW150F-4 1.5 مم OD ، 1.12 مم معرف مجتذب الماصات الدقيقة أداة سوتر ف-97 تستخدم لإعداد الماصات الدقيقة كاميرا CCD بالأشعة تحت الحمراء داج-معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا IR-1000 مكبر للصوت مشبك التصحيح هيكا EPC-10 معالج دقيق أداة سوتر النائب 285 مرحلة XY بيرلي جبل طارق XY مجهر عمودي أوليمبوس BX51WI مقياس التناضح متقدم فيسك 210 مقياس الأس الهيدروجيني ميتلر توليدو FE20