التلاعب الانتقائي بتذبذبات ثيتا في نموذج الماوس

الملخص

المصدر: Bender ، F. et al. ، الوراثي البصري لتذبذبات ثيتا الحصين في الفئران التصرفية.

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لتعديل تذبذبات ثيتا في نموذج فأر معدل وراثيا مع قنوات أيونية حساسة للضوء في الخلايا العصبية الحاجزية الإنسية GABAergic. من خلال توصيل نبضات ضوئية إلى الحصين ، يهدف البروتوكول إلى مزامنة النشاط العصبي وتوليد تذبذبات ثيتا ، والتي يتم تسجيلها كإمكانات مجال محلي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

تم استخدام

PV-Cre ذكور الفئران ، التي تتراوح أعمارها بين 10 و 25 أسبوعا. تم إيواء الفئران في ظل ظروف قياسية في منشأة وظلت في دورة 12 ضوءا / مظلما.

فئة

1. تحضير مصفوفات أسلاك التنغستن لتسجيلات LFP

1. قم بلصق ألياف بصرية واحدة على مصفوفة الأسلاك بحيث يكون طرف الألياف على مستوى أقصر سلك ويكون طرف الألياف على مقربة ، ولكن لا يلمس أسلاك التنغستن. حافظ على زاوية الألياف صغيرة قدر الإمكان لمنع تلف الأنسجة أثناء الزرع.

< p class = "jove_title" >2. التحفيز البصري الوراثي والحصول على البيانات الفيزيولوجية الكهربية

1. تحقق من إخراج الضوء من سلك التصحيح. قم بتقدير ناتج الضوء من طرف الألياف بعد الاتصال اعتمادا على معدل نقل الألياف المزروعة. تأكد من أن ناتج الضوء من طرف الألياف يتراوح بين 5-15 ميجاوات لتمكين التثبيت الموثوق.
2. قم بتوصيل مكبر الصوت الأولي لمرحلة الرأس بالموصل المزروع بشكل مزمن. قم بتوصيل سلك تصحيح الألياف الضوئية بألياف الحصين المزروعة بشكل مزمن لتجارب التحفيز البصري الوراثي. في تجارب التحكم في تحفيز الضوء ، يتم توصيل الألياف الضوئية بطويق وهمي متصل بسماعة الرأس.
3. ضع الماوس في غرفة التسجيل.
4. افتح البرنامج للتحكم في مولد التحفيز لإنشاء بروتوكول التحفيز.
5. حدد القناة التي تتحكم في ليزر DPSS 473 نانومتر.
6. افتح برنامج نظام التسجيل. انقر فوق "ACQ" للحصول على "REC" للتسجيل. انتظر قبل بدء التحفيز الضوئي لتسجيل سلوك خط الأساس (على سبيل المثال ، دقيقتان لاسترداد سرعة خط الأساس أو 30 دقيقة لاستخراج حقول مكان خط الأساس).
7. افتح البرنامج للتحكم في مولد التحفيز. انقر فوق "فتح > الملف" وحدد ملف البروتوكول الذي تختاره. انقر فوق "تنزيل وبدء" لبدء التحفيز الضوئي.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الفئران الكهروضوئية Cre مختبر جاكسون ب 6 ؛ 129P2-Pvalbtm1 (cre) Arbr / J 473 نانومتر ليزر DPSS تقنيات Laserglow ، تورنتو ، أونتاريو ، كندا R471005FX سلسلة LRS-0473 593 نانومتر DPSS ليزر تقنيات Laserglow R591005FX سلسلة LRS-0594 MC_Stimulus الثاني أنظمة متعددة القنوات ، رويتلينغن ، ألمانيا STG 4004 أسلاك التنغستن شركة كاليفورنيا فاين واير ، جروفر بيتش ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية CFW0010954 40 ميكرومتر ، 99.95٪ هيدستيج Neuralynx ، بوزمان ، مونتانا الولايات المتحدة الأمريكية إتش إس -8 مكبرات صوت مصغرة لكسب وحدة الرأس قياده نيورالينكس HS-LED-أحمر-أومني-10 فولت متلاب Mathworks ، ناتيك ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية MC_Stimulus البرمجيات متعدد القنوات, الأنظمة الألياف البصرية متعددة الأوضاع ThorLabs ، داخاو ، ألمانيا FG105LCA 0.22 NA ، منخفض OH ، Ø105 ميكرومتر نواة ، 400 - 2400 نانومتر مقرنة الألياف البصرية متعددة الأوضاع ثورلاب FCMM50-50A-FC مقرنة 1x2 مم ، نسبة انقسام 50:50 ، ألياف GI 50 ميكرومتر ، FC / PC