يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تثبيط MicroRNA بوساطة التيارات المثيرة بعد المشبكي في شرائح الحصين الفأر

830 مشاهدة

⸱

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

المصدر: Thalhammer، A.، et al. الجمع بين علم الوراثة البصرية والحمض النووي الريبي الميكرو الاصطناعي لتوصيف تأثيرات الضربة القاضية الجينية على وظيفة ما قبل المشبكي داخل الدوائر العصبية السليمة. J. Vis. إكسب. (2018)

يوضح هذا الفيديو تثبيط التيارات المشبكية المثيرة بوساطة الحمض النووي الريبي الصغير في شرائح دماغ الحصين الفأر. أصيبت الخلايا العصبية CA3 بناقل فيروسي مؤتلف يؤوي بنية للتعبير عن مراسل الفلورسنت ، وقناة غشائية منشطة بالضوء ، والحمض النووي الريبي الصغير الذي يقلل من تنظيم التعبير عن قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي. عند وضع شريحة في غرفة التسجيل وترقيع خلية عصبية CA1 بماصة تسجيل ، تم استخدام نبضات الضوء لتحفيز القناة التي يتم تنشيطها بالضوء ، مما أدى إلى تدفق الأيونات وتوليد جهد فعل. يؤدي عدم وجود قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي في الخلايا العصبية CA3 إلى تثبيط إطلاق الناقل العصبي ، مما يتسبب في تثبيط التيارات المثيرة بعد المشبكي في الخلايا العصبية CA1 المتصلة متشابكة.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تقييم دور البروتينات قبل المشبكية في الدوائر العصبية السليمة عن طريق التحفيز المستهدف للخلايا العصبية المتساقطة مع علم الوراثة

البصرية

ملاحظة: يتطلب البروتوكول التالي خبرة سابقة في التسجيلات الفيزيولوجية الكهربية في شرائح الدماغ الحادة والوصول إلى إعداد الفيزيولوجيا الكهربية.

  1. حقن الفيروس المؤتلف المرتبط بالغدة مع النمط المصلي الفسيفسائي 1 و 2 (rAAV1 / 2) في الدماغ. تحديد الإحداثيات التجسيمية لمنطقة الدماغ ذات الاهتمام باستخدام الأطالس التجسيمية لدماغ الفأر أو الفئران.
    1. استخدم مجتذب ماصات دقيقة لسحب الماصات الدقيقة للحقن ذات السيقان الطويلة من Ø 7-9 ميكرومتر؛ قم بقص ماصات الح....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1. تقييم دور Cav2.1 [EFa] و Cav2.1 [EFb] في الحصين الأصلي عن طريق التحفيز المستهدف للخلايا العصبية المطروحة باستخدام علم البصريات الوراثي. (أ) مخطط كاسيت التعبير عن تركيبات rAAV المستخدمة للعدوى في الجسم الحي. (ب) قسم الحصين الذي يوضح أن مضان TdTomato يقتصر على منطقة CA3 وتوقعاتها. (ج) التكوين التجريبي:.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات شرائح الدماغ الغرفة المسبقة جهاز هارفارد بكالوريوس الكمبيوتر التصوير المستند إلى كاميرا CCD بيو راد ChemiDoc™ MP كواشف زراعة الخلايا تقنيات الحياة نقب فوردوم ك 1030 EGTA سيغما [إ4378] مرهم جنتاميسين صيدلية محلية الجلوكوز سيغما جي 7021 هيبس سيغما 54459 ماصات دقيقة للحقن ناريشيجي جي دي 1 الأملاح والمنظفات غير العضوية سيغما ك 2-فوسفات الكرياتين كالبيوكيم 237911 كغلوكونات فلوكا 60245 ليزر تقنيات Laserglow LRS-0473-GFM-00100-03 غشاء أميرشام بروتران™ 0.2 ميكرومتر NC إم جي اتب سيغما أ 9187 حامل الماصة الدقيقة ناريشيجي IM-H1 مجتذب الماصات الدقيقة ناريشيجي PC-100 نا3GTP سيغما G8877 نابيروفات سيغما ص 5280 زيوت تشحيم العين صيدلية محلية لاكريجل بوفيدون اليود صيدلية محلية البيتادين جهاز تجسيمي WPI السموم الرباعية توكرس 1069 سام الاهتزاز لايكا VT1200S

استكشف المزيد من المقالات

تثبيط microRNAالتحفيز البصري الوراثيالتعبير عن الناقل الفيروسيقنوات الكالسيوم المبوّبة بالجهدتسجيل تثبيت الرقعةالقنوات المنشطة بالضوءتحضير شرائح الدماغقياس التيار المشبكي