$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. إعداد مصفوفة Micro-Drive التكاملية
- قم بإنشاء مصفوفة محرك أقراص صغيرة لتسجيلات إمكانات المجال المحلي القشرية (LFP) كما هو موضح في مكان آخر. اترك ما لا يقل عن 6 ثقوب معدنية مفتوحة على لوحة واجهة القطب الكهربائي (EIB) لاستخدامها كقنوات تخطيط كهربية القلب / تخطيط كهربية العضل / معدل التنفس (ECG / EMG / BR) متصلة بأسلاك bioflex كما هو موضح في 1.2.
- قم بقطع سلك bioflex إلى 6 قطع بأطوال 5.0 سم. انزع طلاء البولي تترافلورو إيثيلين (PTFE) لكلا طرفي جميع قطع الأسلاك بأطوال ~ 5.0 مم. قم بتوصيل أحد طرفي كل قطعة من قطع الأسلاك بأحد الثقوب المعدنية المفتوحة (قنوات ECG / EMG / BR) في EIB باستخدام دبوس ذهبي.
- قطع سلك المينا إلى قطعتين بطول 5.0 سم. لحام أحد طرفي كل من هذه الأسلاك بالقنوات الأرضية / المرجعية (g / r) على EIB (الشكل 1).
- لتحضير أقطاب تخطيط القلب ، قم بقطع سلك bioflex إلى قطعتين بحجم 16 سم. انزع طلاء PTFE لنهايات هذه القطع السلكية بأطوال ~ 5.0 مم على أحد طرفيه (نهاية قصيرة) و ~ 15 مم على الطرف الآخر (نهاية طويلة).
- قم بتشكيل حلقة سلكية بقطر 2.0 مم عن طريق ثني الطرف الطويل للسلك وتثبيت شكل الحلقة عن طريق اللحام.
- لتحضير أقطاب كهربية الكهربية الكهربية ، قم بقطع سلك bioflex إلى قطعتين بأطوال 8 سم. انزع طلاء PTFE من طرفي هذه القطع السلكية بأطوال ~ 5.0 مم.
- لتحضير أقطاب BR ، قم بقص سلك bioflex إلى قطعتين بأطوال 6.0 سم. انزع طلاء المينا لطرفي هذه القطع السلكية بأطوال ~ 5.0 مم. لحام أحد طرفي كل قطعة من هذه القطع السلكية على رأس برغي من الفولاذ المقاوم للصدأ (قطر الجذع: 1.0 مم ، طول الجذع: 4.0 مم).
- لتحضير الأقطاب الكهربائية الأرضية / المرجعية (غرام) ، قم بتقطيع سلك المينا إلى قطعتين بأطوال 6.0 سم. انزع طلاء المينا لطرفي هذه القطع السلكية بأطوال ~ 5.0 مم. لحام أحد طرفي كل قطعة من هذه القطع السلكية على رأس برغي من الفولاذ المقاوم للصدأ (قطر الجذع: 1.4 مم ، طول الساق: 3.0 مم).
- يقوم الغاز بتعقيم جميع الأقطاب الكهربائية والبراغي غير القابل للصدأ ويحافظ عليها في مكان نظيف.
2. زرع مصفوفة محرك الأقراص الصغيرة التكاملية وأقطاب BR
- إصلاح الفئران على جهاز تجسيم. قم بعمل شق ~ 3.0 سم على الرأس على طول خط الوسط من النقطة بين العينين إلى منطقة الرقبة. كشف الجمجمة.
- قم بعمل قطعتين دائريتين بأقطار 0.7-1.0 مم فوق البصلة الشمية 11.0 مم أمامية و 1 مم ثنائية إلى بريجما باستخدام مثقاب عالي السرعة. قم بزرع قطبين كهربائيين BR في الجمجمة حتى يتم ربط أطراف السيقان اللولبية بسطح الدماغ.
- قم بعمل قطعتين دائريتين بقطر 0.7-1.0 مم فوق القشرة الأمامية 2.7 مم أمامية و 2.7 مم ثنائية إلى بريجما. زرع قطبين g / r في الجمجمة حتى يتم توصيل طرف الجذع اللولبي بسطح الدماغ.
- قم بعمل ستة إلى ثمانية ثقوب بأقطار 1.0 مم في المنطقة المحيطة بحج القحف الكبير. مسامير تثبيت الزرع (قطر الجذع: 1.4 مم ، طول الساق: 3.0 مم) في الجمجمة.
- قم بعمل حج قحف دائري كبير بقطر ~ 2.0 مم فوق الحصين ، 3.8 مم خلفي و 2.5 مم ثنائي إلى بريجما. ضع مصفوفة محرك الأقراص الصغيرة التكاملية بحيث يكون طرف القنية لمصفوفة محرك الأقراص موجودا فوق حج القحف الكبير
- املأ مساحة الفجوة بين طرف القنية وسطح الدماغ ب ~ 100 ميكرولتر من محلولين ، أي 0.5٪ (بالكتلة) ألجينات الصوديوم و 10٪ (بالكتلة) كلوريد الكالسيوم.
ملاحظه: تشكل هذه العملية هلام شفاف في ~ 5 دقائق ، بعد خلط المحاللين على الجمجمة.
- قم بتغطية القنية ، وأقطاب BR ، وأقطاب g / r ، ومسامير التثبيت بأسمنت الأسنان بسمك 0.5 سم. احرص على عدم تغطية الأطراف المفتوحة لأقطاب BR و g / r بالأسمنت في هذه الخطوة.
- قم بلحام الأطراف المفتوحة لأقطاب ECG و EMG و BR و g / r بأطراف الأسلاك الفردية التي كانت متصلة مسبقا ب EIB (انظر الخطوتين 1.2 و 1.3).
- قم بتغطية الجزء السفلي من مجموعة محرك الأقراص الصغيرة التكاملية ، وجميع أسلاك القطب الكهربائي ، بالأسمنت الأسنان. تأكد من تغطية جميع أسلاك القطب الكهربائي بالكامل حتى لا يتمكن الجرذ من خدشها بعد الزرع.
- بعد استعادة الوعي الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي ، أعد إلى قفص منزله الزجاجي الشفاف ، واحتفظ به بمفرده مع حرية الوصول إلى الماء والطعام. بعد الجراحة ، عالج بالمضادات الحيوية (الجنتاميسين).
< p class = "jove_title" >
3. في Vivo Recordings
ملاحظة: يتم تضخيم جميع الإشارات وأخذ عينات منها عند 2 كيلو هرتز وتصفية تمرير النطاق (0.1 - 500 هرتز) باستثناء أنشطة الوحدة (تم أخذ عينات منها عند 30 كيلو هرتز وفلترة ممر النطاق (500 - 6 كيلو هرتز)).
- قم بتوصيل EIB لمصفوفة محركات الأقراص الصغيرة المتكاملة بواجهة جهاز التسجيل.
- تقدم الرباعيات عن طريق تدوير البراغي لبضعة أسابيع بعد الجراحة. بمجرد أن تكون الرباعية مجاورة لمناطق الدماغ المستهدفة ، قم بتسوية الرباعيات في المناطق على مدى عدة أيام لتسجيلات مستقرة.
- راقب الإشارات الكهربائية بينما يتحرك بحرية في غرفة التسجيل.
