$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. إعداد EEG/LFP المترجم المشترك
- نظف وجفف الجمجمة المحيطة بفتحة الأزيز باستخدام قطعة قطن.
- ضع معجون مخطط كهربية الدماغ الموصل بحذر على جانب واحد مسطح من قطب العنكبوت مخطط كهربية الدماغ. اترك ثقبا صغيرا خاليا من معجون مخطط كهربية الدماغ على القطب العنكبوتي للسماح لقطب كهربائي صغير متعدد الطبقات بالمرور عبر الفتحة دون ملامسة المعجون والقطب العنكبوتي. هذا يمنع التلامس الكهربائي بين قطب مخطط كهربية الدماغ والقطب الصغير.
- قم بمحاذاة قطب العنكبوت مع فتحة الأزيز في الجمجمة ، بحيث يكون معجون مخطط كهربية الدماغ مواجها للجمجمة.
- اضغط بعناية على قطب العنكبوت على الجمجمة ، مما يجعل ملامسة الجمجمة بقوة عبر معجون مخطط كهربية الدماغ. قم بإزالة أي عجينة تحجب فتحة الأزيز باستخدام إبرة على حقنة.
- قم بإزالة معجون مخطط كهربية الدماغ المفرط خارج محيط قطب العنكبوت بحيث يكون التلامس بين قطب العنكبوت والجمجمة مقيدا مكانيا بحجم القطب الكهربائي (الشكل 1 ب).
قم - بتشويه معجون مخطط كهربية الدماغ على القطب المرجعي لمخطط كهربية الدماغ وضعه بإحكام داخل الشق الموجود في مؤخرة رقبة الفئران.
- قم بتوصيل أقطاب EEG بمكبر الصوت المسبق عبر مقسم إشارة سلبي لإشارات مقاومة منخفضة (الشكل 2). تأكد من أن مقاومة القطب العنكبوتي أقل من 5 كيلو أوم. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فتأكد من أن معجون مخطط كهربية الدماغ على اتصال جيد بالجمجمة وأن القطب الكهربائي مضغوط بقوة على معجون مخطط كهربية الدماغ. أضف المزيد من معجون EEG إذا لزم الأمر.
- قم بتركيب ذراع مناور دقيق على الإطار التجسيمي. قم بتوصيل قطب كهربائي دقيق خطي مكون من 16 قناة (تباعد 100 ميكرومتر ، مساحة كل موقع 177 ميكرومتر2) بمنصة رأس حادة من 16 قناة مثبتة بإحكام على ذراع المناولة الدقيقة.
- قم بتشويه معجون مخطط كهربية الدماغ على الأقطاب الكهربائية المرجعية لمخطط كهربية الدماغ والقطب الصغير ، ثم ضعها بإحكام داخل الشق (الشكل 1 أ).
- اضبط زاوية ذراع المعالجة الدقيقة بحيث يكون القطب الصغير عموديا على السطح القشري. تتراوح هذه الزاوية عادة بين 25-35 درجة.
- قم بخفض القطب الصغير تحت المجهر عن طريق تدوير مقابض المعالجة الدقيقة بحيث يكون طرف القطب الصغير موجها إلى الفتحة الصغيرة في الجزء السفلي من فتحة الأزيز حتى يخترق القطب العلوي السطح القشري. يجب توخي الحذر لتجنب إجبار القطب الصغير على سطح الجافية لأن ذلك قد يكسر القطب.
- قم بإقران القطب الصغير المكون من 16 قناة بمضخم أولي متصل بوحدة الحصول على البيانات عبر كابل ألياف ضوئية (الشكل 2).
- قم بتشغيل مكبر الصوت الأولي ووحدة الحصول على البيانات والكمبيوتر المتصل بالوحدة. قم بتشغيل صندوق المحفز.
- أدخل القطب الكهربائي الدقيق بشكل طبيعي على السطح القشري عن طريق تدوير مقبض المحور z للمناور الدقيق ببطء إلى عمق 1,500 ميكرومتر.
- اضبط العمق بشكل دقيق عن طريق تطبيق مجموعة من التحفيز على وسادة الشعيرات ومراقبة LFP المستحث المكون من 16 قناة على شاشة الكمبيوتر باستخدام برنامج وحدة الحصول على البيانات المثبتة على جهاز الكمبيوتر. أدر مقبض المحور z بعناية على المعالج الدقيق حتى تحدث أعلى سعة ل LFP المستحث حول القناة 7 (حيث يتزامن هذا مع الطبقة الرابعة في القشرة).
ملاحظه: إعداد قطب مخطط كهربية الدماغ الجانبي Ipsi: بالنسبة لبعض التجارب ، تم وضع قطب عنكبوتي ثان على الجانب الجانبي ipsi من الجمجمة السليمة فوق قشرة البرميل. سمح هذا الإعداد بتسجيل مخطط كهربية الدماغ الثنائي أثناء حالة الراحة للتحقيق في تأثير ثقب الأزيز على إشارة مخطط كهربية الدماغ.
ملاحظه: الإجراء الجراحي لإعداد قطب مخطط كهربية الدماغ مطابق لتلك الموضحة أعلاه ، باستثناء أن العضلة الصدغية على كل جانب من الرأس تم فصلها بعناية عن الجمجمة ، وخياطتها للخلف وربطها بإحكام بالجانب المقابل من الإطار التجسيمي.
ملاحظه: يتطابق إعداد EEG / LFP المتزامن أيضا مع ما هو موضح أعلاه ، مع خطوة إضافية تتمثل في تحميل قطب عنكبوتي ثان بمعجون مخطط كهربية الدماغ ، ثم الضغط عليه بقوة على الجمجمة فوق قشرة البرميل الجانبي.
