مقالة منهجية

تقييم تكوين الارتباط العصبي في الزراعة المشتركة باستخدام التسجيلات الفيزيولوجية الكهربية

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Su و C. T. E. وآخرون. نهج بصري وراثي لتقييم تكوين الوصلات العصبية في نظام الزراعة المشتركة. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح الفيديو التسجيل الفيزيولوجي الكهربي لتقييم الروابط العصبية بين الخلايا العصبية المشتقة من iPSC والخلايا العصبية القشرية للفئران ، مما يؤكد الاتصالات المشبكية في الثقافة المشتركة عن طريق تنشيط القنوات الأيونية الحساسة للضوء والكشف عن التيارات بعد المشبكي.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
فئة

1. التسجيلات الفيزيولوجية الكهربية للخلايا العصبية المشتقة من iPSC

  1. تأكد مما إذا كانت iPSCs البشرية تتصرف مثل الخلايا العصبية الناضجة.
    1. ابحث عن الخلايا المتمايزة عن iPSCs البشرية عن طريق تصور tdTomato باستخدام مجهر متحد البؤر عمودي مزود بعدسة غمر في الماء 60X (0.9 NA).
    2. اسحب ماصة التسجيل إلى مقاومة من 4 إلى 6 أمتار. املأ الماصة الدقيقة للتسجيل بالمحلول الداخلي.
    3. قم بتصحيح خلية tdTomato+ في وضع الخلية الكاملة وسجل إطلاق محتمل الإجراء استجابة للحقن الحالي (مدة 1 ثانية ، زيادات 10 pA) في المشبك الحالي.
  2. تأكد مما إذا كانت إمكانات عمل الخلايا القشرية التي تعبر عن ChR2 يتم استحضارها بشكل موثوق عن طريق التحفيز الضوئي.
    1. ابحث عن الخلايا القشرية التي تعبر عن ChR2 عن طريق تصور GFP تحت مجهر متحد البؤر. قم بإجراء تسجيل مشبك التصحيح للخلية الكاملة على الخلايا القشرية باتباع الخطوات من 1.1.2 إلى 1.1.3.
    2. تأكد من أن جهد الفعل يتم استحضاره بشكل موثوق بواسطة الإضاءة الضوئية باستخدام مصباح قوس زئبقي (100 واط). الطول الموجي لمرشح الإثارة هو 480/40 نانومتر.
  3. إجراء التحفيز البصري الوراثي.
    1. قم بتصحيح خلية tdTomato+ في وضع الخلية الكاملة واضبط مشبك الجهد على -70 مللي فولت. قم بتصفية الإشارات الحالية عند 2 كيلو هرتز والرقمنة عند 10 كيلو هرتز. راقب مقاومات السلسلة التي تتراوح من 10 إلى 20 مترا من أجل الاتساق أثناء التسجيلات.
    2. حفز المجال بأكمله باستخدام مصباح زئبقي 100 واط مع مرشح إثارة 480/40 نانومتر لمدة 30 ثانية.
    3. سجل التيارات بعد المشبكية (PSCs) للخلايا المرقعة الناتجة عن التحفيز الضوئي للخلايا العصبية القشرية قبل المشبكي التي تعبر عن ChR2. اكتشاف وقياس PSCs.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات كلوريد الصوديوم سيغما إس 7653 كيه سي إل سيغما ص 5405 NaHCO3 سيغما الطراز S5761 NaH2PO4 فلوكا 71505 مغنكلوريد2 سيغما M8266 كلوريدالهواء 2 سيغما سي 1016 د (+) - الجلوكوز سيغما G7520 للدراسات الفيزيولوجية الكهربية ك-غلوكونات سيغما ص 1847 كوه كانتو للكيماويات هاتف: 3234400 هيبس سيغما إتش 3375 للدراسات الفيزيولوجية الكهربية EGTA سيغما E3889 نا2ATP سيغما أ 7699 نا3GTP سيغما G8877 الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكات العالمية للأدوات الدقيقة ، Inc 1604323 مصباح الزئبق قصير القوس أوسرام HBO 103 W / 2

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة