مقالة منهجية

تسجيل إمكانات ما بعد المشبكي المثيرة للمجال العصبي في شرائح الحصين الحادة

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Weng، W.، et al. تسجيل اللدونة المشبكية في شرائح الحصين الحادة التي يتم الاحتفاظ بها في نظام غرفة من نوع إعادة التدوير والتروية والغمر. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو إجراء إعداد شريحة دماغية في غرفة الغمر لتسجيل النشاط المشبكي. تتضمن العملية تثبيت الشريحة على ورق العدسة ، والحفاظ على التدفق المستمر للسائل الدماغي النخاعي الاصطناعي (aCSF) لضمان بقاء الخلايا العصبية ، وتحديد موضع أقطاب التحفيز والتسجيل بدقة بالنسبة لمنطقة معينة من الدماغ ذات الاهتمام. يسمح هذا الإعداد بالمراقبة الدقيقة للنشاط المشبكي الأساسي وتأثيرات التحفيز الكهربائي.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. تسجيل الاستجابات المتشابكة في غرفة شريحة الغمر

ملاحظة: انظر جدول المواد.

  1. قم بتسخين محلول aCSF مسبقا في حمام مائي إلى حوالي 28-30 درجة مئوية (سيمنع ذلك تكوين الفقاعات في غرفة التسجيل).
  2. ابدأ نظام إعادة التدوير (4-5 مل / دقيقة) وقم بتنشيط السخان المضمن لموازنة النظام لمدة 1 ساعة على الأقل.
  3. انقع قطعة صغيرة من ورق تنظيف العدسة وشبكة من النايلون مثبتة على سلك بلاتيني على شكل حرف U في حجرة شرائح الغمر لبضع دقائق (الشكل 1).
  4. قم بإزالة السلك البلاتيني على شكل حرف U.
  5. قم بإيقاف تشغيل إعادة التدوير وضع شريحة على ورق تنظيف العدسة.
  6. ضع على الفور شبكة تثبيت الشريحة أعلى الشريحة ، وقم بتشغيل المضخة ، واترك الشريحة تتوازن لمدة 30 دقيقة دون غمس الهدف في aCSF.
  7. املأ الماصة الدقيقة البورسليكات (أي قطب التسجيل) ب aCSF (مقاومة الطرف: 1-2 MΩ، مملوءة ب 1/3 ب aCSF) وقم بتثبيتها في حامل الماصة.
  8. ضع قطب تحفيز التنغستن المعزول بالإيبوكسي الذي تم اختباره في حامل المناور والأسلاك المرجعية في حجرة الشريحة.
  9. أضف قطبا مرجعيا ثانيا إلى الغرفة وقم بتوصيله بالمقبس المرجعي لمقدمة قطب التسجيل (الشكل 1 أ).
  10. في برنامج التحكم في مكبر الصوت ، انقر فوق مربع "وضع المشبك الصفري" وتابع بالنقر المزدوج فوق مربع "قائمة كسب الإخراج". اختر كسب "100" ، وانقر نقرا مزدوجا فوق "مربع قائمة مرشح التمرير العالي (Bessel)" ، واختر "0.1 هرتز" ، وانقر نقرا مزدوجا فوق "مربع قائمة مرشحات التمرير المنخفض (AC)" لاختيار "3 كيلو هرتز".
  11. في برنامج التسجيل ، انقر فوق "الحصول على | افتح البروتوكول." اختر بروتوكولا يحتوي على إعدادات تسمح بالتحفيز العرضي ورقمنة الإمكانات المضخمة عند 10-20 كيلو هرتز لمدة 50-100 مللي ثانية ويؤدي تلقائيا إلى تشغيل عازل محفز بعد 10 مللي ثانية من بدء التسجيل العرضي.
  12. ضع أقطاب التحفيز والتسجيل في خط وبالتوازي مع الطبقة الهرمية ، على سبيل المثال (الشكل 1 ب والشكل 2).
  13. انقر فوق "اكتساب | تحرير البروتوكول" واختر علامة التبويب "المشغل" (في النافذة المنبثقة). انقر فوق مربع "مصدر الزناد" واختر "شريط المسافة" كمصدر المشغل. انقر فوق الزر "موافق". انقر فوق الزر "تسجيل" لبدء الاستحواذ ولاحظ النافذة المنبثقة بزر الزناد.
  14. في برنامج عزل التحفيز ، انقر فوق مربع "التحكم في الجهد" وأدخل "0". انقر فوق الزر "تنزيل". انقر فوق نافذة "برنامج التسجيل" واضغط على مفتاح المسافة. كرر هذه الدورة عن طريق إدخال قيم متسلسلة من 1 إلى 8 ، على سبيل المثال ، عند خطوات 1 مللي فولت في مربع "التحكم في الجهد".
  15. قم بربط قوة التحفيز بقيم منحدر fEPSP وحدد قوة التحفيز المطلوبة للحصول على 40٪ من الحد الأقصى لمنحدر fEPSP. انقر فوق "مربع التحكم في الجهد" وأدخل القيمة المحددة. انقر فوق الزر "تنزيل".
    ملاحظه: يستخدم عازل المنبه لتطبيق نبضات الجهد أو التيار القصير على أنسجة المخ. يمكن أن تحتوي النبضات ثنائية الطور على 100 ميكرو ثانية لكل مرحلة.
  16. في برنامج التسجيل ، انقر فوق زر الإيقاف ثم قائمة "اكتساب". انقر فوق "تحرير البروتوكول" واختر علامة التبويب "المشغل" في النافذة المنبثقة. انقر فوق مربع مصدر المشغل واختر "المؤقت الداخلي" كمصدر المشغل. انقر فوق الزر "موافق". انقر فوق زر التسجيل الذي يبدأ التسجيل التلقائي لإمكانات المجال كل 30 ثانية ، على سبيل المثال. انقر فوق الزر "إيقاف" بعد 30-60 دقيقة.
  17. انقر فوق قائمة "اكتساب" ، وانقر فوق "فتح البروتوكول" ، واختر بروتوكول الحث المطلوب للدونة المشبكية ، وانقر فوق الزر "موافق". انقر فوق الزر "تسجيل" لتنشيط التحفيز والتسجيل عالي التردد تلقائيا. انقر فوق الزر "إيقاف".
    ملاحظه: في حالة الدراسات المتعلقة باللدونة المشبكية ، قم بتطبيق أحد نماذج الاستقراء القياسية للتقوية طويلة المدى أو الاكتئاب طويل الأمد بعد تسجيل خط الأساس المطول. يتم تصوير أمثلة تمثيلية للتعديل الناتج للإرسال المشبكي في الشكل 4 والشكل 5.
  18. في برنامج التسجيل ، انقر فوق "الحصول على | افتح البروتوكول" واختر نفس البروتوكول كما في الخطوة 4.12. انقر فوق الزر "موافق" ثم انقر فوق "تسجيل". استمر في تشغيل التسجيلات المحتملة للحقل تلقائيا لمدة 2-4 ساعات ، على سبيل المثال. انقر فوق الزر "إيقاف" لإنهاء التسجيل.
  19. في حالة الدراسات الصيدلانية ، قم بتطبيق المركب مباشرة على خزان aCSF إذا كانت الإدارة الدائمة للمركب مطلوبة (الشكل 3).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: مكونات الكربوجين للتدفق الخارجي للتجارب في غرفة شريحة الغمر. (أ) عرض غرفة شرائح الغمر. تم تصوير السلك البلاتيني على شكل حرف U مع ألياف النايلون التي تحمل شريحة الحصين. تم لف الأسلاك الفضية حول قنية صغيرة ، مما أدى إلى إنشاء ملف لزيادة مساحة نهاية السلك الفضي. تم وضع السلك المرجعي للتحفيز في غرفة التدفق الخارج، وكان مرجع التسجيل في الغرفة الرئيسية. للحفاظ على استقر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات معدات ومواد الفيزيولوجيا الكهربية مجتذب الماصة العمودي ناريشيجي ، اليابان PC-10 طاولة عزل الاهتزاز ميريتس ، اليابان ADZ-A0806 غرفة تسجيل من النوع المغمور وارنر إنسترومنتس RC-26GLP حمام مائي ثرموستاتي تشونغتشنغ ييتشي ، الصين HH-1 4 محاور Micromanipulator سوتر ، الولايات المتحدة الأمريكية MP-285 ، MP-225 الأسلاك البلاتينية أدوات الدقة العالمية بي تي ب 406 مكبر الأجهزة الجزيئية ، الولايات المتحدة الأمريكية متعدد المشبك 700B نظام الحصول على البيانات الأجهزة الجزيئية ، الولايات المتحدة الأمريكية ديجي داتا 1440 أ برنامج Anaysis الأجهزة الجزيئية ، الولايات المتحدة الأمريكية كلامبكس 10.2 المجهر الفلوري نيكون، اليابان FN1 مصدر ضوء LED مجموعة Lumen Dynamics ، كندا X-cite 120LED الماصات الدقيقة جهاز هارفارد GC150TF التسجيل خارج الخلية ماصات البورسليكات الدقيقة سوتر ، الولايات المتحدة الأمريكية BF150-86 مشبك التصحيح قطب التنغستن أنظمة AM ، الولايات المتحدة الأمريكية 575500 مضخة تمعجية أطول ، الصين BT00-300T أنابيب للمضخة التمعجية ISMATEC ، Wertheim ، ألمانيا SC0309 1x تدفق داخلي ، ID: 1.02 مم أنابيب للمضخة التمعجية ISMATEC ، Wertheim ، ألمانيا SC0319 2x أنابيب للتدفق الخارج ، ID: 2.79 مم كاميرا CCD PCO, ألمانيا pco.edge sCMOS ورق تنظيف العدسة كوداك أنبوب طرد مركزي مخروطي 50 مل حراري علمي 339652 الغرفة المسبقة وارنر إنسترومنتس بكالوريوس الكمبيوتر سخان مضمن وارنر إنسترومنتس [سف-28] تحكم في درجة الحرارة وارنر إنسترومنتس تي سي -324 ب الكواشف المطلوبة كلوريد الصوديوم كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 10019318 كيه سي إل كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 10016318 KH2PO4 كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 10017618 MgCl2 · 6 ساعات2O كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 10012818 كلوريدالهواء 2 كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 10005861 NaHCO3 كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 10018960 الجلوكوز كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 10010518 NaH2PO4 كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 20040718 هيبس سيغما إتش 3375 بيروفات الصوديوم سيغما أ 4043 MgSO4 كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 20025118 هيدروكسيد الصوديوميوم كاشف سينوفارم الكيميائي ،
الصين 10019718

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة