تسجيل مخطط كهربية الشبكية المقترن المباشر للظهارة الصبغية في الفأر

الملخص

المصدر: Miyagishima, K. J., et al. مخطط كهربية الشبكية المقترن المباشر (DC-ERG) لتسجيل الاستجابات الكهربائية المستحثة بالضوء لظهارة صبغة شبكية الفأر. J. Vis. Exp. (2020).

يوضح هذا الفيديو تسجيل مخطط كهربية الشبكية المقترن المباشر (DC-ERG) على ظهارة صبغية شبكية الفأر (RPE) متكيفة مع الظلام ومخدرة. بعد تطبيق قطرات متوسعة ، يتم وضع في إعداد التسجيل ، ويتم وضع القطب الشعري المملوء بمخزن مؤقت للملح على القرنية. بعد إنشاء خط الأساس ، يتم تسجيل DC-ERG.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تحديد موضع الماوس والقطب الكهربائي

1. احتفظ بالفئران طوال الليل في صندوق جيد التهوية ومحكم الغلق للتكيف مع الظلام.
2. تم تخدير عن طريق حقن الكيتامين داخل الصفاق (80 ملغم/كغ) والزيلازين (8 ملغم/كغ).
3. ضعي قطرة 0.5٪ بروباراكائين هيدروكلوريد موضعيا لتخدير القرنية ، بالإضافة إلى انخفاض 2.5٪ فينيليفرين هيدروكلوريك و 0.5٪ تروبيكاميد لتوسيع حدقة العين.
4. قم بقص شعيرات الماوس بالمقص لمنع الوخز غير المقصود من إزعاج الأقطاب الكهربائية الشعرية الزجاجية أثناء التسجيل.
   ملاحظه: يحتوي بروتوكول تحفيز مخطط كهربية الشبكية المقترن المباشر (DC-ERG) داخل نظام ERG على العديد من إجراءات التحفيز المضمنة التي يمكن تحديدها بالنقر فوق الخطوة (السهم للأمام) أو الخطوة (السهم للخلف). الخطوات 1 و 4 و 5 فقط في البرنامج مطلوبة لإعداد تسجيل DC-EGG وتنفيذه.
5. في نظام ERG ، يتحقق البرنامج من اختيار المريض الصحيح. انقر فوق الزر الأخضر للبروتوكولات. ضمن وصف البروتوكول، حدد DC-ERG. ثم انقر فوق تشغيل. تحقق من أن هذا هو الاختبار الصحيح الذي يتم إجراؤه بالنقر فوق نعم.
6. استخدم محفز الضوء الأحمر المعين للخطوة 1/6 ، لتشغيل الضوء الأحمر داخل القبة للمساعدة في وضع الماوس والأقطاب الكهربائية أثناء مراقبة التغييرات في المقاومة.
7. ضع الماوس على طاولة تسجيل ساخنة وقم بوضع خيمة على جلد الساق الخلفية بعناية باستخدام الملقط. أمسك قطب الإبرة بإحكام بيد واحدة وأدخله تحت الجلد في الساق الخلفية لتثبيته في مكانه.
8. ضع القطب الكهربائي المرجعي للفضة / Siverchloride (Ag / AgCl) (جدول المواد) داخل الفم بحيث تستقر الحبيبات الملبدة على طول الخد الخلفي ويتم تثبيتها في مكانها خلف الأسنان.
   ملاحظه: لا ينبغي استخدام أقطاب الأسلاك الذهبية كقطب مرجعي للفم لأن لها خصائص مقاومة مختلفة وتزيد من ضوضاء الذروة إلى الذروة.
9. قبل وضع الأقطاب الكهربائية الشعرية على عين الماوس ، أمسك حامل القطب الكهربائي مع الشعيرات الدموية الزجاجية عموديا ونفض الغبار عن حامل القطب بإصبع السبابة لإزالة أي فقاعات قد تكون قد تم إدخالها. املأ الطرف بمحلول الملح المتوازن من هانكس (HBSS) باستخدام إبرة 25 جم متصلة بحقنة وافحص للتأكد من عدم وجود فقاعة هواء محاصرة عند الحافة. ضع حامل حامل القطب الكهربائي بحيث يكون الطرف المفتوح للشعيرات الدموية المملوءة ب HBSS على اتصال لطيف بالقرنية.
10. استخدم احتياطات خاصة لتجنب إدخال فقاعات الهواء عن طريق إمساك موزع جل العين المزيم مقلوبا والتخلص من القطرات الأولية. ضع قطرة من جل العين المزيوت على كل عين للحفاظ على الموصلية ومنع الجفاف أثناء التسجيل.

2. تسجيل DC-ERG

1. انقر فوق الخطوة (السهم للأمام) لتحديد الخطوة 4/6 "Long Flash No-Li".
2. انقر فوق مقاومة. استخدم شاشة فحص المعاوقة لفحص مقاومة العينين اليمنى واليسرى. من المتوقع أن تكون قيم المعاوقة لأقطاب التسجيل في كل عين متشابهة (~ 39 كيلو أوم). من المتوقع أن تكون قيم المعاوقة للأرض والأقطاب الكهربائية المرجعية أقل من 10 كيلو أوم).
3. انقر فوق معاينة لعرض آثار العين اليمنى واليسرى. انتظر حتى يتم تحقيق خط أساس مستقر (<10 دقائق). انقر فوق إيقاف للخروج من معاينة التتبع.
   ملاحظه: لن تتحسن التغييرات المفاجئة في اتجاه الانجراف أو الضوضاء الشاذة في التسجيل بمرور الوقت وستتطلب تحديد القطب الشعري الذي يحتاج إلى الاهتمام. السبب الأكثر ترجيحا هو فقاعة يتم إدخالها إلى طرف القطب. أعد ملء الطرف ب HBSS. انقر فوق معاينة مرة أخرى للتحقق من خط الأساس.
4. انقر فوق الخطوة (السهم للأمام) لتحديد الخطوة 5/6 "Long Flash 10 cd 7 min." انقر فوق Run لبدء التسجيل.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Ag / AgCl (الفم) القطب الكهربائي شركة WPI الحلقة 1 القطب المرجعي للفم للماوس بلاط السيراميك أداة سوتر CTS تستخدم لقطع الأنبوب الشعري الزجاجي إلى الحجم المناسب عصا تنظيف قطنية المنتجات الطبية البيوريتانية 867-WC لا الغراء لاستخدامها كمباعد لتحسين ملاءمة مجموعة حامل القطب الكهربائي نظام مخطط كهربية الشبكية (ERG) Diagnosys LLC نظام E3 نظام الفيزيولوجيا الكهربية البصرية لتشخيص أمراض العيون في أبحاث الرؤية والتجارب الدوائية بنسن المووقد أرغوس تكنولوجيز BW20002460 أو مكافئ لتشكيل الزجاج تحت اللهب أنبوب شعري زجاجي (1.5 مم) أدوات سوتر BF150-75 لملء HBSS والاتصال بالقرنية محلول الملح المخزن في هانك (HBSS) شركة ثيرمو فيشر العلمية 14175-095 متاح تجاريا. الصيانة في RT مرشح في الخط واتمان 6722-5001 لحماية مضخة التفريغ من الهباء الجوي كابل منخفض الضوضاء لحاملي الأقطاب الكهربائية الدقيقة شركة WPI 5372 مقترح لتحسين طول وموضع الكابلات وتجميعات حامل الأقطاب الكهربائية مفصل الكرة المغناطيسية شركة WPI 500871 لتحديد الموضع المغناطيسي لمجموعة حامل القطب الكهربائي على المسرح ماتلاب الرياضيات MatLab: لتحرير برنامج التحليل Matlab Curvefit Toolbox الرياضيات Toolbox ل MatLab (مطلوب فقط لتحرير برنامج التحليل) مترجم MatLab الرياضيات Toolbox ل MatLab (مطلوب فقط لتحرير برنامج التحليل وإعادة إصداره) وقت تشغيل MatLab الإصدار 9.5 الرياضيات R2018b (9.5) مطلوب لتشغيل برنامج التحليل: https://www.mathworks.com/products/compiler/matlab-runtime.html حاملات الأقطاب الكهربائية الدقيقة (45 درجة) شركة WPI مه345-15 لعقد الشعيرات الدموية إبرة (25 جا) كوفيديان 8881250313 لملء الأنابيب الشعرية ب HBSS إبرة (أرضية) القطب الكهربائي إيقاع لينك 13 مم - واحد elctrode قطب إبرة تحت الجلد (أرضي) للماوس (بطول 13 مم ، إبرة قطرها 0.4 مم ، سلك رصاص 1.5 متر) منظم / مكيف طاقة ف ورمان ف -1800 أو ما يعادل إزالة إزاحة التيار المستمر من الضوضاء التي يتم إدخالها عبر خط الطاقة حقنة (12 مل) مونوجيكت 1181200777 لملء الأنابيب الشعرية ب HBSS مشبك تي كول بارمر 06852-20 لتجميع حامل القطب الكهربائي مجفف الفراغ بيل آرت 420120000 قاع وغطاء من البولي كربونات شفاف العلاج الدوائي جل العين المزيوت الكون 0078-0429-47 يساعد على تليين سطح القرنية والحفاظ على التلامس الكهربائي مع الأقطاب الكهربائية الشعرية فينيليفرين هيدروكلوريد 2.5٪ أكورن 17478-201-15 قطرات العين الميدرياتية قصيرة المفعول (لتوسيع حدقة العين) بروباراكايين هيدروكلوريد 0.5٪ أكورن 17478-263-12 مخدر موضعي لتقطير العيون تروبيكاميد 0.5٪ أكورن 17478-101-12 قطرات العين الميدرياتية قصيرة المفعول (لتوسيع حدقة العين) زيلازين أناشد ع ت - 362949 آر إكس مسكن ومرخي للعضلات زيتامين (كيتامين حمض الهيدروكلوريك) فيتون 501072 مخدر للحقن العضلية