تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.
< p class = "jove_title" >
1. إعداد الفيزيولوجيا الكهربية وتسجيلها
- ضع شريحة الإسفين في غرفة التسجيل وقم بتأمين الشريحة باستخدام قيثارة أو نظام تثبيت. قم بتنقية الأنسجة باستمرار بمعدل 7-10 مل / دقيقة مع فقاعات ACSF دافئة (35 درجة مئوية) مع الكربوجين.
- تحديد الخلايا العصبية MOC قليلة القوقعة الإنسي المسماة وراثيا في النواة البطنية للجسم شبه المنحرف VNTB باستخدام التألق مع مرشحات انبعاث 561 نانومتر لتسجيلات المشبك التصحيح. اقلب الشريحة إذا لم تكن هناك خلايا يحتمل أن تكون قابلة للتصحيح.
- باستخدام بصريات DIC ، ركز على جذر العصب السمعي على الجانب السميك من الشريحة واستخدم مناور دقيق لتحريك قطب تحفيز التنغستن ثنائي القطب إلى جذر العصب السمعي وبرفق في سطح ><الأنسجة.
ملاحظه: تم استخدام أقطاب الشفط في تجارب تحفيز العصب السمعي في مختبرات أخرى. يمكن استخدام أقطاب زجاج ثيتا أو طرق التحفيز البصري إذا كان ذلك ممكنا على مستحضرات محددة أخرى.
- انقل مجال الرؤية مرة أخرى إلى VNTB لاختيار خلية عصبية MOC لاستهدافها للفيزيولوجيا الكهربية لمشبك التصحيح.
- املأ ماصة التسجيل بمحلول داخلي مناسب للتجربة المقترحة.
- التصحيح والتسجيل من الخلايا العصبية MOC في تكوين الخلية الكاملة. تعويض سعة الغشاء ومقاومة السلسلة إذا لزم الأمر.
- اضبط سعة التحفيز الكهربائي لجذر العصب السمعي للحصول على أحداث ما بعد المشبكية المتسقة في الخلايا العصبية MOC.
ملاحظه: قد يكون من الضروري تحريك قطب التحفيز.
- قم بتشغيل بروتوكولات التحفيز المناسبة لمراقبة التيارات المشبكية المستحثة في MOC (مشبك الجهد).
ملاحظه: يمكن استخدام تحضير شريحة الإسفين مع أي أدوات مشبك تصحيح نموذجية مثل تسجيلات التصحيح السائبة ، وعلم الأدوية ، وعلم البصريات الوراثي ، وتصوير الكالسيوم ، وإلغاء الناقل العصبي ، وما إلى ذلك.
