Method Article

تحفيز جذر العصب السمعي وتسجيلات التيار بعد المشبكي في شريحة إسفين دماغ الفأر

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Fischl ، M. J. ، et al. تحضير شريحة إسفين في المختبر لتقليد اتصال الدائرة العصبية في الجسم الحي. J. Vis. Exp.(2020)

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لتحفيز جذر العصب السمعي وتسجيل التيارات بعد المشبكي في الخلايا العصبية قليلة القوقعة الإنسية في شرائح إسفين دماغ الفأر.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

< p class = "jove_title" >1. إعداد الفيزيولوجيا الكهربية وتسجيلها

  1. ضع شريحة الإسفين في غرفة التسجيل وقم بتأمين الشريحة باستخدام قيثارة أو نظام تثبيت. قم بتنقية الأنسجة باستمرار بمعدل 7-10 مل / دقيقة مع فقاعات ACSF دافئة (35 درجة مئوية) مع الكربوجين.
  2. تحديد الخلايا العصبية MOC قليلة القوقعة الإنسي المسماة وراثيا في النواة البطنية للجسم شبه المنحرف VNTB باستخدام التألق مع مرشحات انبعاث 561 نانومتر لتسجيلات المشبك التصحيح. اقلب الشريحة إذا لم تكن هناك خلايا يحتمل أن تكون قابلة للتصحيح.
  3. باستخدام بصريات DIC ، ركز على جذر العصب السمعي على الجانب السميك من الشريحة واستخدم مناور دقيق لتحريك قطب تحفيز التنغستن ثنائي القطب إلى جذر العصب السمعي وبرفق في سطح ><الأنسجة. ملاحظه: تم استخدام أقطاب الشفط في تجارب تحفيز العصب السمعي في مختبرات أخرى. يمكن استخدام أقطاب زجاج ثيتا أو طرق التحفيز البصري إذا كان ذلك ممكنا على مستحضرات محددة أخرى.
  4. انقل مجال الرؤية مرة أخرى إلى VNTB لاختيار خلية عصبية MOC لاستهدافها للفيزيولوجيا الكهربية لمشبك التصحيح.
  5. املأ ماصة التسجيل بمحلول داخلي مناسب للتجربة المقترحة.
  6. التصحيح والتسجيل من الخلايا العصبية MOC في تكوين الخلية الكاملة. تعويض سعة الغشاء ومقاومة السلسلة إذا لزم الأمر.
  7. اضبط سعة التحفيز الكهربائي لجذر العصب السمعي للحصول على أحداث ما بعد المشبكية المتسقة في الخلايا العصبية MOC.
    ملاحظه: قد يكون من الضروري تحريك قطب التحفيز.
  8. قم بتشغيل بروتوكولات التحفيز المناسبة لمراقبة التيارات المشبكية المستحثة في MOC (مشبك الجهد).
    ملاحظه: يمكن استخدام تحضير شريحة الإسفين مع أي أدوات مشبك تصحيح نموذجية مثل تسجيلات التصحيح السائبة ، وعلم الأدوية ، وعلم البصريات الوراثي ، وتصوير الكالسيوم ، وإلغاء الناقل العصبي ، وما إلى ذلك.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments مجهر متحد البؤر المستقيم A1R نيكون إنسترومنتستر يمكن أن يكون الفيزيولوجيا الكهربية ومجهر التصوير أي مجهر متوافق مع الفيزيولوجيا الكهربية زجاج البورسليكات الكهربائي مع خيوط OD 1.5 مم ، معرف 1.1 مم ، طول 10 سم أداة سوتر BF150-110-10 زجاج ماصة لقط التصحيح حشو القطب الكهربائي MicroFil WPI سي إم إف 20 جي حشو ماصة القطب الرقعي سخان المحلول في الخط وارنر إنسترومنتس (GSAdvantage) ش 27 ب سخان نظام التروية للشرائح أنظمة المعالجة الدقيقة المتعددة تدخلات Sutter MPC-200 مع MP285 معالجات دقيقة لمشبك التصحيح ووضع قطب التحفيز مجتذب الماصة الأفقي P-1000 للماصات الدقيقة الزجاجية أدوات Sutter FG-P1000 التصحيح المشبك مجتذب الماصة مكبر للصوت والبرامج هيكا EPC-10 / Patchmaster التالي يمكن أن يكون أي مكبر للصوت / برنامج غرفة التسجيل وارنر إنسترومنتس RC26G شريحة "حمام" أثناء التسجيل تسجيل غرفة القيثارة وارنر إنسترومنتس 640253 يثبت الشريحة أثناء تسجيل الفيزيولوجيا الكهربية غرفة حضانة الشريحة بناء مخصص غرفة تثبيت مدفأة ومؤكسجة للشرائح أثناء التعافي بعد التقطيع وحدة عزل التحفيز أ.م.ب.ي. ايزو فليكس وحدة عزل التحفيز للفيزيولوجيا الكهربية حقنة 60CC فيشر ساينتفيك (إنترامولز) 14-820-11 الفيزيولوجيا الكهربية ، معالجة سوائل التروية تحكم في درجة الحرارة وارنر إنسترومنتس (GSAdvantage) تي سي -324 سي شريحة تحكم في درجة حرارة نظام التروية الأنابيب 1/8 OD 1/16 معرف فيشر ساينتفيك (إنترامولز) 14-171-129 الفيزيولوجيا الكهربية ، معالجة سوائل التروية Tugsten قطب كهربائي ثنائي القطب متحد المركز WPI TM33CCINS قطب محفز للفيزيولوجيا الكهربية

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Auditory Nerve RootPostsynaptic Current RecordingsMouse Brain Wedge SliceMedial Olivocochlear NeuronsPatch Clamp ElectrophysiologyElectrical StimulationExcitatory Inhibitory SignalsCochlear Nucleus CellsWhole Cell ConfigurationEpifluorescence Microscopy

Related Articles