مقالة منهجية

تسجيل الاستجابات المشبكية CA3-CA1 في شريحة الحصين الفئران

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Shetty ، MS et al. ، التحقيق في وضع العلامات / الالتقاط المشبكي والالتقاط المتقاطع باستخدام شرائح الحصين الحادة من القوارض.J. Vis. إكسب. (2015).

يوضح هذا الفيديو طريقة لتسجيل الاستجابات المشبكية CA3-CA1 في شريحة الحصين للفئران. يحدد الخطوات المتبعة في وضع الأقطاب الكهربائية المحفزة والتسجيل على شريحة الحصين وقياس جهد ما بعد المشبكي الاستثاري (fEPSP) لتقييم قوة الاستجابة المتشابكة.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. تسجيل الاستجابات المشبكية CA3-CA1

ملاحظة: يظهر إعداد الفيزيولوجيا الكهربية المستخدم لتسجيل إمكانات المجال في الشكل 1 أ. يوصى بشدة باستخدام قفص فاراداي إذا كان التداخل الكهربائي خارج نطاق السيطرة بعد التأريض المناسب للإعدادات الكهربائية. تتوفر تجاريا العديد من الأنواع المختلفة من الغرف المغمورة والواجهة. ومع ذلك ، يفضل استخدام غرف الواجهة حيث تظهر الشرائح استجابات متشابكة أكثر قوة فيها.

  1. تحديد مواقع الأقطاب الكهربائية
    1. قم بتشغيل الجهاز الكهربائي (المحفزات ومكبرات الصوت) المراد استخدامها. قم بتركيب وتأمين الأقطاب الكهربائية المحفزة والتسجيل في حوامل زجاج شبكي للمعالجات الدقيقة.
      ملاحظه: نحن نستخدم أقطاب كهربائية أحادية القطب ، مطلية بالورنيش ، من الفولاذ المقاوم للصدأ بمقاومة 5 MΩ لكل من أغراض التحفيز والتسجيل.
    2. قبل الاستخدام ، أدخل هذه الأقطاب الكهربائية داخل الشعيرات الدموية الزجاجية المسحوبة وقم بتثبيتها بغراء إيبوكسي ، مما يكشف عن جزء صغير فقط من طرف القطب (الشكل 1E). هذا يعطي قوة للأقطاب الكهربائية النحيلة ويساعد على تثبيتها بإحكام في حاملات الأقطاب الكهربائية.
    3. مسترشدا تحت المجهر ، ضع القطب (الأقطاب) المحفزة في الطبقة الرادياتوم لمنطقة CA1 لتحفيز ألياف Schaffer الجانبية وقطب التسجيل في المنطقة التغصنية القمية ل CA1 لتسجيل استجابات مجال EPSP (fEPSP).
      ملاحظه: يعطي الاقتراب من سطح السائل فوق الشريحة باستخدام الأقطاب الكهربائية صوتا يساعد على تحديد موقع سطح الشريحة بسرعة (بشرط أن يكون مكبر الصوت متصلا بمكبر صوت).
    4. في تجارب وضع العلامات والالتقاط المشبكي ، وفقا لحاجة التجربة ، ضع قطبين أو ثلاثة أقطاب محفزة (S1 أو S2 أو S3) على جانبي قطب التسجيل لتحفيز مدخلين مستقلين أو أكثر ولكن متداخلين. ضع أقطاب التحفيز والتسجيل على بعد حوالي 200 ميكرومتر.
    5. إذا لزم الأمر ، حدد موقع قطب تسجيل آخر في الطبقة الهرمية لتسجيل ارتفاع عدد السكان (الشكل 2 أ). عندما يلمس كلا القطبين الشريحة ، باستخدام برنامج الاستحواذ ، قم بإعطاء تحفيز اختبار لضمان إشارة fEPSP مناسبة.
      ملاحظه: نستخدم نبضات ثنائية الطور ذات تيار مستمر (مدة النبضة 0.1 مللي ثانية / نصف موجة) لتحفيز الاختبار.
    6. بمجرد الحصول على إشارة fEPSP مناسبة ، قم بخفض الأقطاب الكهربائية بعناية بعمق حوالي 200 ميكرومتر باستخدام مقابض الحركة الدقيقة للمعالجات. اترك 20 دقيقة حتى تتعافى الشرائح.
  2. علاقة المدخلات والمخرجات
    1. حدد علاقة المدخلات والمخرجات (التحفيز الوارد مقابل ميل fEPSP) لكل مدخل عن طريق قياس قيمة المنحدر في نطاق من شدة التيار. قم بإجراء ذلك بين 20 ميكرو أمبير إلى 100 ميكرو أمبير. ثم اضبط شدة التحفيز لكل إدخال للحصول على 40٪ من الحد الأقصى لميل fEPSP. حافظ على هذا ثابتا طوال التجربة.
    2. بعد 15-20 دقيقة ، ابدأ في تسجيل خط الأساس. راقب منحدر fEPSP عن كثب خلال هذه الفترة وأعد ضبط شدة التحفيز إذا كان المنحدر يتقلب أكثر من 10٪ من القيمة المحددة وابدأ خط أساس جديد. سجل خط أساس مستقر لمدة 30 دقيقة على الأقل أو 1 ساعة قبل المتابعة.
      ملاحظه: للاختبار أو التحفيز الأساسي ، نستخدم أربع عمليات مسح من 0.2 هرتز ، نبضات تيار ثابت ثنائية الطور (0.1 مللي ثانية لكل قطبية) تعطى كل 5 دقائق. ثم يعتبر متوسط ميل هذه الاستجابات الأربعة تكرارا واحدا. يتم تصفية الإشارات وتضخيمها بواسطة مكبر للصوت تفاضلي ، ورقمنتها باستخدام محول تناظري إلى رقمي ومراقبتها عبر الإنترنت باستخدام برامج مخصصة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1.إعداد الفيزيولوجيا الكهربية لتسجيلات الجهد الميداني التي تتكون من (أ) محفزات (ب) مضخم تفاضلي (ج) محول تناظري إلى رقمي (د) راسم الذبذبات (ه) كمبيوتر مزود ببرنامج اقتناء (و) مجهر سطح طاولة مقاوم للاهتزاز (ز) مع >تكبير 4x (ح) واجهة غرفة شريحة دماغية (ط) نظام نضح ل ACSF وإمداد الكربوجين (ي) وحدة التحكم في درجة الحرارة (ك) مصدر إضاءة (ل) معالجات مع حاملات أقطاب كهربا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات I. المواد الكيميائية المكونة ل ACSF 1. كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) سيجما ألدريتش S5886 2. كلوريد البوتاسيوم (KCl) سيجما ألدريتش ص 9541 3. كبريتات المغنيسيوم سباعي الهيدرات (MgSO4.7H20) سيجما ألدريتش M1880 4. ثنائي هيدرات كلوريد الكالسيوم (CaCl2.2H2O) سيجما ألدريتش سي 3881 5. فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة (KH2PO4) سيجما ألدريتش ص 9791 6. بيكربونات الصوديوم (NaHCO3) سيجما ألدريتش الطراز S5761 7. D-الجلوكوز اللامائي (C6H12O6) سيجما ألدريتش جي 7021 II. أدوات الفيزيولوجيا الكهربية 1. المجهر أوليمبوس ، اليابان الموديل: SZ61 2. تحكم في درجة الحرارة شركة تصميم الأنظمة العلمية كندا PTC03 3. مضخم التيار المتردد التفاضلي AM Systems ، الولايات المتحدة الأمريكية نموذج 1700 4. محفز النبض المعزول AM Systems ، الولايات المتحدة الأمريكية موديل 2100 5. راسم الذبذبات رود آند شوارتز إتش إتش 722 6. المحول الرقمي التناظري كامبريدج للتصميم الإلكتروني المحدودة كامبريدج ، المملكة المتحدة CED باور 1401-3 7. واجهة غرفة شريحة الدماغ شركة تصميم الأنظمة العلمية كندا بكالوريوس الأعمال01 8. مضخة الأنابيب Ismatec ، Idex Health & Science ، ألمانيا ريجلو أنالوج 9. مقياس الجريان الكربوجين كول بارمر 03220-44 10. إضاءة الألياف الضوئية دولان جينر للصناعات فايبر لايت MI-150 11. المعالجات الدقيقة Marzhauser Wetzlar ، ألمانيا 00-42-101-0000 (MM-33) 00-42-102-0000 (مم -32) 12. أقطاب كهربائية AM Systems ، الولايات المتحدة الأمريكية 571000 (الفولاذ المقاوم للصدأ ؛ 0.010 ، 5MΩ ، 8 درجات)

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Field EPSP Schaffer Collateral Fibers

مقالات ذات صلة