$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. الجراحة
ملاحظة: تعتمد التفاصيل الدقيقة لجراحة التحفيز المغلق على نوع مجسات التسجيل المستخدمة ومناطق الدماغ المستهدفة. ومع ذلك ، في معظم الحالات ، تتكون الجراحة النموذجية من الخطوات التالية.
- أحضر قفصا به فأر إلى غرفة الجراحة لزرعه بمسبار سيليكون أو مصفوفة أقطاب كهربائية لتسجيل النشاط العصبي.
- قم بتخدير القوارض باستخدام 2-2.5٪ من الأيزوفلوران وإصلاح الرأس في إطار تجسيم. تأكد من أن فاقد للوعي أثناء الجراحة من خلال ملاحظة أي رد فعل حركي لمحفزات اللمس الخفيفة.
- ضع مرهم للعين لتقليل الجفاف أثناء الجراحة.
- حلق المنطقة الجراحية وتطهير الجلد بمحلول الكلورهيكسيدين 2٪ وكحول الأيزوبروبيل 70٪.
- حقن الليدوكائين (5 ملغم/كجم) تحت فروة الرأس فوق منطقة الدماغ حيث سيتم زرع الأقطاب الكهربائية.
- قم بعمل شق في فروة الرأس فوق منطقة الغرسة المستقبلية ، واستخدم مشرطا وقطعة قطن لإزالة السمحاق من الجمجمة المكشوفة.
- حفر 4-8 ثقوب في الجمجمة لزرع مسامير التثبيت (~ 0.5 مم) كدعم هيكلي للزرع. قم بتوصيل البراغي بالجمجمة عن طريق إدخالها في الثقوب وتأكد من تثبيتها بإحكام في مكانها.
- قم بحفر حج القحف عند الإحداثيات المحددة وقم بإدخال غرسة microdrive / المسبار.
ملاحظه: سيعمل البروتوكول الموصوف للتحفيز في الحلقة المغلقة مع أي منطقة من مناطق الدماغ يتم إدخال الأقطاب الكهربائية فيها.
- قم بإصلاح محرك الأقراص الصغيرة / المسبار وأي موصل واجهة كهربائية مطلوب بالجمجمة باستخدام أكريليك الأسنان. يجب أن تكون كمية أكريليك الأسنان كافية لربط الغرسة بإحكام ، ولكن لا ينبغي أن تتلامس مع الأنسجة الرخوة المحيطة.
- بعد الجراحة ، راقب عن كثب حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي. خلال الأيام الثلاثة التالية، يتم تطبيق مسكن تحت الجلد (على سبيل المثال، Metacam، 1 ملغ/كغ) ومضاد حيوي للوقاية من العدوى (على سبيل المثال، إنروفلوكساسين، 10 ملغ/كغ). < / >
ملاحظه: عادة ما تترك للتعافي من الجراحة لمدة أسبوع واحد قبل أي اختبار أو تسجيل.
2. تثبيت البرنامج
ملاحظة: تم اختبار هذا على Windows 10 ، إصدار 64 بت.
- تثبيت برامج الحصول على البيانات ومعالجتها.
- قم بتثبيت نظام الحصول على البيانات Cheetah 6.4 (https://neuralynx.com/software/category/sw-acquisition-control) ، والذي يتضمن مكتبات للتفاعل مع نظام اقتناء الفهد.
- قم بتثبيت SpikeSort3D (https://neuralynx.com/software/spikesort-3d) أو أي برنامج آخر يستخدم KlustaKwik27 لفرز السنبل. يستخدم برنامج الكشف عبر الإنترنت تعريفات نظام المجموعة من محرك KlustaKwik. قد يعمل هذا البرنامج على نفس الكمبيوتر أو على أجهزة كمبيوتر منفصلة على نفس الشبكة.
- قم بتثبيت NetComDevelopmentPackage (https://github.com/leomol/cheetah-interface/blob/master/NetComDevelopmentPackage_v3.1.0) ، والذي يمكن تنزيله أيضا من https://neuralynx.com/software/netcom-development-package.
- تثبيت Matlab (https://www.mathworks.com/downloads/؛ تم اختبار التعليمات البرمجية على إصدار Matlab R2018a). تأكد من تمكين Matlab في جدار حماية Windows. عادة ، ستظهر نافذة منبثقة أثناء الاتصال الأول.
- قم بتسجيل الدخول إلى حساب Matlab. اختر الترخيص. اختر الإصدار. اختر نظام التشغيل.
- قم بتنزيل المكتبة التالية لتشغيل الأحداث عبر الإنترنت من https://github.com/leomol/cheetah-interface واستخراج الملفات إلى مجلد "المستندات / Matlab" بالكمبيوتر. يتم توفير نسخة من الرمز في المواد التكميلية المصاحبة.
3. الحصول على البيانات الأولية
- ابدأ الحصول على البيانات باستخدام برنامج الفهد.
- سجل بضع دقائق من البيانات المتصاعدة لملء أشكال موجة القالب.
- أوقف الحصول على البيانات وقم بإجراء فرز سبايك على البيانات المسجلة.
- افتح SpikeSort3D ، وانقر فوق ملف | القائمة | قم بتحميل ملف Spike وحدد ملف spike من المجلد الذي يحتوي على بيانات مسجلة.
- انقر فوق قائمة نظام المجموعة، ثم نظام المجموعة التلقائي باستخدام KlustaKwik، مع ترك الإعدادات الافتراضية، وانقر فوق تشغيل.
4. تجربة الحلقة المغلقة
- استئناف الحصول على البيانات في الفهد.
- افتح Matlab.
- افتح ClosedLoop.m وانقر فوق تشغيل. بدلا من ذلك ، في نافذة أوامر Matlab ، قم بتنفيذ ClosedLoop () . تأكد من أن ClosedLoop.m موجود على مسار Matlab. إذا أراد المستخدم استخدام دالة مخصصة لاستدعاء كل مشغل، فقم بتنفيذ ClosedLoop('-callback', customFunction) بدلا من ذلك، حيث يكون customFunction مقبضا لتلك الوظيفة.
- قم بتحميل معلومات الارتفاع المحددة في التسجيل الأولي بالنقر فوق تحميل ، وتصفح مجلد التسجيل ، وتحديد أحد ملفات البيانات المتصاعدة (.ntt ، .nse).
- حدد خلية عصبية واحدة أو عدة خلايا عصبية من شأنها أن تؤدي إلى التحفيز بالنقر فوق مربع الاختيار أسفل الأشكال الموجية المرسومة.
- حدد الحد الأدنى لعدد الخلايا العصبية التي ستؤدي إلى التحفيز عن طريق كتابة عدد صحيح في مربع النص "الحد الأدنى من التطابقات". بعد ذلك ، حدد النافذة الزمنية التي تعتبر فيها المسامير المطابقة لأشكال الموجة المختلفة نشطة بشكل مشترك عن طريق كتابة رقم في مربع نص "النافذة".
- انقر فوق إرسال للبدء. سيبدأ هذا في تشغيل الأحداث عبر الإنترنت (النغمات كافتراضية) بناء على نشاط الارتفاع للخلايا العصبية المحددة.