$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تحضير:
- تخدير الجرذ باستخدام مستنشق (إيزوفلوران) بنسبة 1-2٪ يتم تسليمه للتأثير أو عن طريق الحقن (الكيتامين ، الزيلازين ، الأسيبرومازين). جرعة التخدير عن طريق الحقن هي كما يلي: 95.0 مجم / كجم من الكيتامين ، 10.0 مجم / كجم من الزيلازين ، 0.075 مجم / كجم من الأسيبرومازين.
ملاحظه: نستخدم بنجاح كلا من أساليب التخدير المستنشقة والحقن عند إجراء بروتوكول تسجيل CMAP هذا ، دون تفضيل.
- يجب الحفاظ على في عمق التخدير المناسب قبل بدء الجراحة ، وحتى انتهاء الجراحة ، وحتى يصبح البوبرينورفين ساري المفعول بعد الجراحة. تأكد من التخدير المناسب عن طريق قرصة إصبع القدم لفترة وجيزة لتحديد عدم استنباط استجابة الانسحاب. بالإضافة إلى ذلك ، اختبر منعكس القرنية بقطعة قطن. خلال العملية الجراحية ، حدد أن معدل ضربات القلب ومعدل التنفس لم يزدا ، مما يشير إلى أن عمق التخدير أصبح خفيفا جدا.
- ضع مرهما بيطري على عيون لمنع الجفاف أثناء التخدير.
- يجب على الجراح غسل يديه بمطهر (مقشر الكلورهيكسيدين) قبل البدء في الجراحة. يجب أن يرتدي الجراح قفازات معقمة وقناع وجه وثوب أو معطف مختبر نظيف. يجب غسل جميع الأدوات وتعقيمها قبل الجراحة. أضف شريط مؤشر التعقيم داخل مجموعة الأدوات قبل التعقيم على مستوى الأدوات للتحقق من اكتمال التعقيم. يجب على الجراح التحقق من أن الخط الكامل على الشريط أسود قبل بدء الجراحة. قم بلصق الجزء الخارجي من الصندوق بشريط الأوتوكلاف المشار إليه أيضا. إذا كان سيتم إجراء عملية جراحية على عدة في نفس اليوم ، فقم بتنظيف الأدوات بين العمليات الجراحية وتعقيمها في معقم من الخرز الزجاجي. إذا لزم الأمر ، قم بتعقيم طرفي الجهاز في معقم الخرز الزجاجي عن طريق وضع مقبض الجهاز في جهاز التعقيم للوقت المناسب ، وإزالة الجهاز باستخدام مرقئ معقم ، وتبريده في حقل معقم ثم وضع الطرف الوظيفي للأداة في معقم الخرز الزجاجي للفترة المناسبة.
- بمجرد تخدير ، ضعه على لوح جراحي مع السطح الظهري لأسفل والبطن متجها لأعلى بحيث يمكن استخدام الشريط اللاصق لتأمين الأطراف الأمامية للحيوان في لوح الجراحة.
- حلق السطح البطني ذيليا بدءا من قاعدة الجمجمة وتأكد من حلق المنطقة المحيطة بالبطن على جانبي خط الوسط اعتمادا على الحجاب الحاجز النصفي الذي يتم تسجيله. ضع بوفيدون اليود على السطح المحلوق للجلد.
2. التحضير لتسجيلات CMAP:
- بعد تحضير ، ضع القطب الأرضي تحت الجلد في الذيل (الشكل 1).
- ضع القطب المرجعي تحت الجلد في منطقة أسفل البطن المقابلة.
- ضع الجل الموصل على شريط سطح ذاتي اللصق أو قطب تسجيل قرص (أبعاد قطب الشريط السطحي: 0.5 × 3 سم) ، ثم ضع القطب السطحي بشكل عرضي على طول الهامش الساحلي أحادي الجانب.
- ضع الأقطاب الكهربائية المحفزة عبر الجلد على بعد 0.5 سم من القصبة الهوائية ومتفوقة على الترقوة. أدخل الأقطاب الكهربائية بعمق 1.0 سم تقريبا عبر الجلد. قم بتأمين الأقطاب الكهربائية يدويا حتى لا يتحرك موقعها مع المحفزات اللاحقة.
ملاحظه: أقطاب كهربائية محفزة بزاوية 90 درجة بالنسبة للجلد في موقع الإدخال.
< p class = "jove_title" >
3. تسجيلات إمكانات عمل العضلات المركبة (CMAP):
- الحصول على تسجيلات الفيزيولوجيا الكهربية باستخدام محفز / مكبر للصوت متبوعا بتحليل البيانات بمساعدة الكمبيوتر.
- يجب أن تكون معلمات التحفيز لتحفيز السحب الفردي 0.5 مللي ثانية ، نبضات فوق الأقصى 1.0 هرتز. يجب أن يتراوح سعة الحافز بين 6.0 و 8.0 فولت (الشكل 2 أ) .< / >
ملاحظه: في التجربة ، استخدم شدة التحفيز بنفس السعة عبر. الهدف هو تعظيم سعة الاستجابة باستخدام الحد الأدنى من سعة التحفيز. من المهم ملاحظة أن الاستجابة الأولية التي تحدث في وقت التحفيز هي قطعة أثرية تحفيزية. بالإضافة إلى ذلك ، يجب توخي الحذر للحصول على استجابة CMAP يسبقها خط أساس مستقر / مسطح بعد قطعة التحفيز ، والتي تتبعها بعد ذلك استجابة CMAP السريعة. للحصول على مثل هذه الاستجابة ، قد يكون من الضروري إعادة وضع أقطاب التحفيز و / أو التسجيل.
- انتظر 30 ثانية بين التحفيز وكرر 10 محفزات متتالية للحصول على متوسط الاستجابة (الشكل 2B-C). قم بقياس السعة من خط الأساس إلى الذروة (الشكل 2 أ). إجراء تحفيز العصب الحجابي خلال مرحلة الدورة التنفسية للحيوان عندما لا يتم تنشيط العصب الحجابي / الحجاب الحاجز. يمكن تكرار الإجراء على نفس للحجاب الحاجز النصفي المقابل.
- بعد جلسة تسجيل CMAP النهائية ، قم بتقطيع إذا تم إجراء تلطيخ الوصلة العصبية العضلية (NMJ). قم بإجراء تسجيلات CMAP بشكل متكرر على نفس مرة واحدة تقريبا كل أسبوع (أو على فترات زمنية من اختيارها).
- بعد تسجيلات CMAP للبقاء على قيد الحياة ، اسمح للحيوان بالتعافي على وسادة تسخين الماء الدافئ المتداولة ، وراقب باستمرار أثناء التعافي حتى يستيقظ ومستلقي بشكل صارم. لا تعيد الذي خضع لعملية جراحية إلى صحبة الأخرى حتى يتعافى تماما.
- بمجرد الاستلقاء الرجسية ، راقب كل 12 ساعة لأول 48 ساعة (مرة واحدة يوميا بعد ذلك). إذا بدا أن يعاني من الجفاف (الجلد المترهل ، الخمول) ، فقم بإعطاء السوائل (محلول الرنين المرضع ؛ تحت الجلد ؛ 1-2 مل لكل حقنة ، مع تدوير المواقع ؛ مرتين في اليوم) حتى يستقر الوزن بعد الجراحة وفقدان السوائل. زود بالطعام المخفف في أطباق صغيرة خلال فترة ما بعد الجراحة الحادة إذا لزم الأمر لتشجيع الأكل إذا لم تتمكن من الوصول إلى وحدة تغذية غطاء القضيب السلكي.
- يتم تطبيق البوبرينورفين بجرعة 0.05 ملغ/كغ قبل نهاية الجراحة ثم على فترات 12 ساعة لأول 24 ساعة (وتعتمد على علامات الألم/الإجهاد بعد ذلك) عن طريق الحقن تحت الجلد (تدوير الموقع). إذا لوحظت علامات الألم أو الضيق بعد ذلك ، عالج بالبوبرينورفين. تشمل العلامات التي تدل على الألم / الضيق قلة النشاط ، والأصوات ، وقلة الأكل أو الشرب (الجفاف) ، وفقدان الوزن المفرط ، والحراسة ، والقضم المفرط أو الخدش في موقع الشق. تشمل المعايير الإضافية المستخدمة في تحديد الألم والضيق عدم الاستجابة للمنبهات الدخيلة ، والنطق العابر أو غير المبرر ، والتنفس الصعب أو غير الطبيعي ، والإفرازات الأنفية العينية المستمرة ذات اللون البني المحمر ، والنعواب الملحوظ. راقب أيضا الأدلة على سوء النظافة التي قد تشير إلى إصابة مريضة. إذا لوحظ أن لا يزال في محنة بعد 72 ساعة من العلاج (وفقا لمعايير الألم / الإجهاد الموضحة أعلاه ، وبعد تلقي بروتوكول المسكن الموصوف أعلاه) ، فقم بالقتل الرحيم للحيوان.
