تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تحضير القطب الكهربائي (الشكل 1A-C)
ملاحظة: مواقع دبوس الكمبيوتر هي مجرد جهة اتصال ذات شوق كجزء من واجهة الإشارة في أجهزة الاتصال. يتكون من موصل ذكر يتم توصيله بالموصل الأنثوي.
- افصل بعناية المسامير الذكرية والإناث عن مواقع دبوس الكمبيوتر (الشكل 1 أ) بمساعدة كماشة. قم بتوصيل المسامير الذكرية والإناث معا لتشكيل قطب كهربائي وتطبيق سيانواكريليت لإنشاء رابطة لاصقة قوية (الشكل 1 ج).
- ضع الأقطاب الكهربائية في دورق مملوء بالماء المقطر وضعه في منظف بالموجات فوق الصوتية لمدة 10 دقائق. انقلها إلى فرن تجفيف على حرارة 45 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
< ص الفئة = "jove_title" >
2. الإجراء الجراحي (الشكل 1D-F)
- تحضير الأدوات الجراحية المعقمة والأجهزة التجسيمية. تخدير جرو الفئران حديثي الولادة باستخدام تخدير الأيزوفلوران (2.5٪) بالهواء. عندما يتم تخدير الجرو بعمق ، اضبط جرعة الأيزوفلوران على 1.0٪. قم بإجراء قرصة الذيل أو إصبع القدم قبل الجراحة لضمان العمق المناسب للتخدير.
- قم بإصلاح رأس الجرو في الجهاز التجسيمي عن طريق وضع قضبان الأذن في قنوات الأذن وتشديدها قليلا.
ملاحظه: لا تقم بتشديد قضبان الأذن بشكل مفرط ، لأن جمجمة حديثي الولادة ناعمة جدا.
- الحفاظ على المجال الجراحي المعقم عن طريق رش جميع المعدات بنسبة 70٪ من الإيثانول. قم بعمل شق 15 مم على الرأس باستخدام مشرط. باستخدام الملقط ، اسحب فروة الرأس برفق بعيدا عن خط الوسط عند الزوايا الأربع. ضع بعض القطن المنقوع بالمحلول الملحي تحت الجلد لإبقاء الشق مفتوحا على مصراعيه (الشكل 1 د).
- ابحث عن نقاط بريجما ولاجدا على الجمجمة وقم بتمييزها بقلم رصاص. استخدم إبرة حقنة (26 جم) لعمل فتحتين لدغتين في قشرة الفص الجبهي (PFC) والحصين.
ملاحظه: يقع PFC عند +1.8 مم خلف بريغما و -0.5 مم جانبيا لخط الوسط ، بينما يقع الحصين عند -2.0 مم أمام بريغما و ±0.5 مم جانبيا لخط الوسط (الشكل 1D و E). يجب ألا يزيد عمق القطب عن 2 مم تحت سطح القشرة لتقليل تلف الدماغ.
- استخدم الملقط لتثبيت الأقطاب الكهربائية وإدخال الأقطاب المرجعية والتسجيل في PFC والحصين ، على التوالي. ضع مرهم الإريثروميسين حول القطب لتجنب أي عدوى محتملة. إصلاح القطب باستخدام سيانواكريلات.
- قم بإعداد الأسمنت الأكريليكي للأسنان بحيث يكون له قوام لزج ولزج. ضع أسمنت الأسنان لتغطية الأقطاب الكهربائية وبقية الجمجمة.
ملاحظه: جفف الجمجمة جيدا قبل وضع الأسمنت الأسنان.
- ضع 5٪ حمض البيكريك على الأقطاب الكهربائية لحمايتها.
ملاحظه: يجب أن يتم الإجراء بأكمله في غطاء للسلامة الحيوية للحفاظ على ظروف معقمة.
- قم بإزالة من الإطار التجسيمي وحقن 300 ميكرولتر من الجلوكوز بنسبة 10٪ تحت الجلد. ضعه على بطانية ساخنة للتعافي. تأكد من أن دافئ (37 درجة مئوية) ومتنقل (أي تعافى تماما). يتم تطبيق البوبرينورفين داخل الصفاق (0.05 ملغ/كغ) للألم بعد الجراحة.
ملاحظه: لا تترك دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي (أي السلوك والحركة الطبيعية).
- أعد الجرو إلى قفص منزله مع سده بعد أن يستعيد وعيه. انتظر لمدة يومين حتى يتعافى تماما.
فئة
3. تسجيل مخطط كهربية الدماغ
- بعد الشفاء التام ، قم بتوصيل الأقطاب الكهربائية المزروعة على جمجمة الجرو بمكبر الصوت في قفصه الخاص. قم بتوصيل مكبر الصوت بمحول تناظري إلى رقمي وقم بتوصيل المحول بجهاز كمبيوتر ؛ يجب التعامل مع خطوط التوصيل بعناية حتى لا تتشابك.
- حدد معدل أخذ العينات 10,000 هرتز على الأقل على وحدة الحصول على البيانات للتسجيل (عرض النطاق الترددي للمرسل هو Hz 1-100). تأكد من أخذ عينات من البيانات بشكل صحيح.
- بعد الحصول على التسجيل الأساسي ، قم بحقن الجرو داخل الصفاق بحمض كاينيك (KA ، 2 مجم / كجم) للحث على نوبات الصرع. بعد 15 دقيقة من حقن KA ، راقب وسجل إفرازات الصرع. عادة ما تكون النوبات الناتجة عن طريق KA جسدية.
ملاحظة: تبلغ مدة منشط الإيكتال حوالي 15.2 ±0.9 ثانية ، ومدة النوبة حوالي 62±5 ثانية. يمكن الوقاية من النوبات في الفئران حديثي الولادة عن طريق حقن هيدرات الكلورال بتقنية IP (400 ملغم/كغ).
- احفظ البيانات الرقمية وقم بتحليلها باستخدام حزم برامج معالجة الإشارات ، مثل spike2. الكشف عن مستوى القدرة لمكونات التردد المختلفة في إشارة مخطط كهربية الدماغ لحديثي الولادة عن طريق إجراء تحليل طيف الطاقة. احسب الطاقة في إطار زمني مدته دقيقة واحدة عن طريق إيجاد سعة جذر متوسط المربع من 1 إلى 100 هرتز (نطاق EEG).
