مقالة منهجية

CD4 + T - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية

DOI:

10.3791/315

⸱

أكتوبر 1, 2007

 ,  , 
1Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's Hospital, 2Massachusetts Institute of Technology

في هذه المقالة

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. تعد قناة ميكروفلويديك مع سطح CD4 + المضادة للbiotinlayted.
  2. ضخ 10 مليلتر من الدم في العينة 5 مل / دقيقة في قناة ميكروفلويديك مع ضخ حقنة.
  3. اخراج الدم في 20 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة مع برنامج تلفزيوني.
  4. حقن محلول مخفف FACS lysing (مخفف إلى 10 ٪ من الأسهم مع حل PBS) في 5ul/min لمدة 15 دقيقة.
  5. احتضان لمدة 15 دقيقة.
  6. حقن CD3 الابتدائي + الحل الأضداد (مخفف إلى 10 ٪ من الأسهم مع حل PBS) في 5 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة.
  7. احتضان لمدة 2 ساعة.
  8. طرد قناة مع برنامج تلفزيوني في 5 مل / دقيقة لمدة 15 دقيقة.
  9. ضخ 20 ٪ AF488 CD4 + الأضداد ، و 0.2 ٪ محلول المخزون دابي ، و 10 ٪ CD3 الثانوية في الضد + 5 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة في نفس الوقت.
  10. احتضان لمدة 20 دقيقة.
  11. طرد قناة مع برنامج تلفزيوني في 5 مل / دقيقة لمدة 15 دقيقة.
  12. عدد الخلايا تحت المجهر الفلورسنت :
    1. أبيض (بصري) -- الأسود والأبيض : خلية والغبار
    2. الأشعة فوق البنفسجية (دابي) -- أزرق : الخلية فقط
    3. الأزرق (CD4 +) -- الأخضر : T - اللمفاويات والوحيدات
    4. الأخضر (CD3 +) -- الأحمر : T - اللمفاويات فقط

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
قناة PDMS دقيقةتم تصنيعها بواسطة قالب SU-8
دمدم متبرع به من شخص بشري سليم. مستشفى ماس جنرال (Mass General Hospital)، 10 X كريات دم بيضاء عالية الكثافة أو مستشفى بريغهام والنساء (Brigham and Women’s Hospital).
PBSمحلول منظمInvitrogen14190محلول ملحي منظم بالفوسفات من دولبيكو (Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline) بتركيز 1x.
محلول تحلل FACSBD Biosciences349202مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS.
جسم مضاد Anti-CD4+ مرتبط بالبيوتينBeckman Coulter Inc.IM0704تم تحضير السطح باستخدام جسم مضاد Anti-CD4+ مرتبط بالبيوتين، مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS/BSA بعد الخلط مع 0.2mg من المركز و1ml من الماء منزوع الأيونات.
goat anti-hCD3deltapABSanta Cruz Biotechnology, Inc.sc-1128مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS
rabbit anti-goat IgG PESanta Cruz Biotechnology, Inc.sc-3755جسم مضاد ثانوي للجسم المضاد anti-CD3، مخفف إلى 10% من المحلول المركز باستخدام PBS
anti-human CD4+BD Biosciences557695موسوم بـ Alexa Fluor 488، مخفف إلى 20% من المحلول المركز باستخدام PBS.
DAPIInvitrogenD1306محلول 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride، مخفف إلى 0.2% من المحلول المركز باستخدام PBS.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

PBS DAPI CD4 CD3

مقالات ذات صلة