مقالة منهجية

تصور تكوين المشابك للخلايا العصبية الحبيبية المخيخية في مراحل النمو المختلفة

مايو 29, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chan، U. ، et al. ، الاستفادة من التثقيب الكهربائي في الجسم الحي بعد الولادة لدراسة مورفولوجيا الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية وتطور المشبب. J. Vis. Exp. (2021).

يوضح هذا الفيديو تحليل تطور الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية عن طريق تصوير شرائح أنسجة المخ المثبتة مسبقا من الفئران المصنفة ببروتين الفلورسنت، التقاط صور Z-stack عالية الدقة باستخدام مجهر متحد البؤر ، وقياس المعلمات الهيكلية بما في ذلك طول العصبية ، وتكوين المخلب المتغصني ، ومساحة السطح ، والحجم لدراسة تكوين التشابك العصبي.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات من والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. التحليلات المورفولوجية للخلايا العصبية الحبيبية المخيخية أو CGNs - إعادة بناء ثلاثية الأبعاد (3D) ومساحة السطح والحجم الخلوي

  1. صورة CGNs أحادية الكهربية على مجهر متحد البؤر بهدف 63x مع تكبير 2x ، والتقاط صور z-stack بمعدل 0.5 ميكرومتر لكل مكدس. صور خلية واحدة لكل نافذة صورة للسماح بتحليل الصور وإعادة بنائها بسهولة.
  2. قم بتثبيت المكون الإضافي Simple Neurite Tracer ل FIJI باستخدام الرابط التالي (https://imagej.net/Simple_Neurite_Tracer:_Basic_Instructions) لتتبع بنية CGNs المثقبة بالكهرباء بسهولة وكفاءة في مساحة ثلاثية الأبعاد (3D).

ملاحظة: هناك نسخة محدثة من المكون الإضافي (https://imagej.net/SNT).

  1. تحليل طول العصبية وتشكيل المخلب الشجيري بطريقة أعمى باستخدام متتبع Neurite البسيط. قم بتحميل صور z-stack أحادية القناة ل CGNs الكهربائية على FIJI ، وانقر فوق الإضافات | التجزئة | متتبع العصبة البسيط ( الشكل 1D ).
  2. قم بالوصول إلى القائمة المنسدلة، وحدد إنشاء عارض ثلاثي الأبعاد جديد ( الشكل 1D).
  3. قم بالتمرير إلى قاعدة التغصنات ، حيث تتصل بسوما الخلية ، وابدأ مسارا بالنقر فوق التقاطع. تتبع المسار يدويا بالنقر فوق الأقسام التي تكون فيها إشارة ملء الخلية أكثر سطوعا ، والضغط على [y] للاحتفاظ بالتتبع. تتبع حتى نهاية التغصنات إذا كانت لا تحتوي على مخلب أو حتى قاعدة المخلب وقم بتأكيد المسار بالضغط على [f] ( الشكل 2D ).
  4. بعد ذلك ، تتبع المخلب عن طريق بدء مسار في قاعدة الهيكل والتتبع حتى نهاية أطول عصب. تتبع الفروع الثانوية والثالثية عن طريق الضغط باستمرار على [ctrl] على Windows أو [alt] على نظام التشغيل Mac OS والنقر فوق المسار. قم بتأكيد المسار بالضغط على [f].
  5. لاحظ أن قياسات الآثار مرئية في نافذة منفصلة ؛ اجمع جميع قياسات فروع المخلب (الأولية والثانوية والثالثية) للحصول على الطول الإجمالي لكل مخلب.
  6. لتحليل مساحة السطح والحجم الخلوي ل CGNs المثقلة بالكهرباء ، قم بتنزيل برنامج تحليل الخلايا Imaris (https://imaris.oxinst.com/).

ملاحظة: يمكن أيضا استخدام FIJI لإعادة بناء الخلايا ثلاثية الأبعاد من صور z-stack باستخدام المكونات الإضافية المتاحة بسهولة والمجانية. بالإضافة إلى ذلك ، يحتوي Simple Neurite Tracer على ميزة عرض حجمي ، ولكن تم استخدام Imaris للأسباب الموضحة أدناه.

  1. قم بتحميل صورة z-stack ل CGN مثقوب بالكهرباء على Imaris. قم بالوصول إلى مجموعة أدوات إعادة البناء ثلاثية الأبعاد بالضغط على تجاوز الصوت.
  2. لإعادة إنشاء CGN، اضغط على الأسطح، وحدد منطقة اهتمام تشمل الخلية بأكملها داخل نافذة الصورة. بمجرد الانتهاء، اضغط على السهم الأزرق للأمام في الزاوية اليمنى السفلية أسفل إنشاء.
  3. إذا كانت الصورة تحتوي على قنوات متعددة لإشارات مختلفة، فحدد القناة التي تحتوي على CGN الكهربائي، واضغط على السهم الأزرق للأمام
  4. باستخدام الشريط الجانبي ، قم بتعيين العتبة المطلوبة التي تناسب إشارة الخلية المثقبة بالكهرباء بدقة أكبر. قم بالتكبير بالقرب من سطح الخلية لتحديد العتبة بدقة. بمجرد الانتهاء، اضغط على السهم الأخضر المزدوج لإعادة بناء الخلية والحصول على مساحة السطح وحجم الحجم من البيانات الوصفية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: fixed ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets - root = '1' data-sheets-baot = '1'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Roboto ؛ حجم الخط: 12pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>Imaris< td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: الروبوت ؛ حجم الخط: 12pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ > Bitplane< td style='background-color:#ffffff;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> < td style='لون الخلفية:#ffffff;اللون:#1a202c;عائلة الخط:Roboto;حجم الخط:12pt;وزن الخط:عادي;الفائض:مخفي; الحشوة:0px 3px;المحاذاة الرأسية:أسفل;المساحة البيضاء:عادي;التفاف الكلمة:break-word;wrap-strategy:4;'>Zeiss 780 عمودي البؤرZeiss780< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Z Stack

مقالات ذات صلة