التصوير الحي لعين ذبابة الفاكهة العذراء باستخدام الفحص المجهري الفلوري

الملخص

Source: Hellerman، M.B.، et al. Live-imaging of the ذبابة الفاكهة العين العذراء. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح الفيديو تقنية تصوير مباشر لدراسة زخرفة العين في ذبابة الفاكهة خادرة ميلانوغاستر. تتيح العلامات الموسومة بالبروتين الفلوري الأخضر (GFP) تصور التنظيم الخلوي والتمايز أثناء تكوين بنية العين النامية.

البروتوكول

1. التصوير الفلوري

ذبابة الفاكهة NOTE:NOTE: التصوير الذي يتجاوز 4 ساعات قد يبطئ أو يوقف تشكل العين. style='هامش أسفل:0;margin-top:0;padding-inline-start:48px;' start='3'>
1. استخدم برنامج deconvolution المناسب لتقليل الخلفية وتعزيز تباين صور القسم التسلسلي. لكل ملف z-stack، قم بتنفيذ ما يلي في برنامج التألق المتقدم لمجموعة تطبيقات Leica (LAS AF): انتقل إلى لوحة الأدوات، وحدد 3D Deconvolution، وانقر فوق تطبيق.
2. ملاحظة: قد تفشل خوارزمية MP في إنشاء صورة موحدة في التركيز للأنسجة التي تم أخذ عينات زائدة منها.

2. Image processing

the live ذبابة الفاكهة synsil سوف تتحول وتنمو طوال عملية التصوير. وبالتالي ، قد لا تتوافق مراكز الصور التي تم جمعها في نقاط زمنية متتالية مع نفس النقطة في ذبابة الفاكهة
1. من علامة التبويب "ملف" في القائمة الرئيسية، افتح "البرامج النصية" وحدد "تحميل الملفات في المكدس".
2. ملاحظة: إذا تم تحديد هذا الخيار، فقد يستخدم البرنامج خوارزمية محاذاة تشوه بيانات الصورة.

المواد

< الرقم class = 'table'>

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
GMR-GAL4; UAS-a-cat: GFP ، ubi-DE-Cadherin: GFP ; + / SM5-TM6b
UAS-DCR-2 ؛ UAS-a-cat: GFP ، ubi-DE-Cadherin: GFP ؛ + / SM5-TM6b
25 × 75 × 1 مم شريحة مجهر زجاجي	فيشر ساينتفيك	12-550-413
22 × 40 مم غطاء زجاجي	VWR	48393-172
ملقط	أدوات العلوم	الدقيقة 91150-20
ورق كروماتوغرافيا واتمان 3 مم	فيشر ساينتفيك	05-713-336
فازلين	فيشر ساينتفيك	19-086-291
30 مل حقنة	فيشر العلمية	S7510-30
أدوبي فوتوشوب CS5	أدوبي
لايكا TCS SP5 DM المجهر	لايكا مايكروسيستمز
LAS AF الإصدار 2.6.0.7266 برنامج المجهر	لايكا مايكروسيستمز