$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
- التحضير لجلسة التصوير
- قم بتشغيل إعداد التصوير مسبقا واترك الليزر يسخن ويستقر ، إذا لزم الأمر.
- تخدير الماوس. ضع الفأر في غرفة تحريض التخدير عند 3٪ أيزوفلوران في 1 لتر / دقيقة O 2 وانتظر حتى يفقد وعيه. تقييم التخدير باستخدام اختبار انعكاس قرصة إصبع القدم.
- استخدم الملقط لإزالة الفيلم اللاصق بعناية من لوحة حامل الرأس. أمسك الماوس في اليد ولوحة حامل الرأس بالأصابع. قم بإزالة الفيلم برفق لتجنب إتلاف المستحضر.
- ضع الماوس تحت المجهر ، فوق سجادة التدفئة ، وقم بتأمين لوحة الرأس بالحامل ( الشكل 1D ).
- ضع مخروط الأنف لتغطية الخطم وتقليل الأيزوفلوران إلى 1.5-2٪.
- ضع مرهم العين على عيون الفأر.
- نظف قنية التصوير عن طريق شطفها بالماء منزوع الأيونات. استخدم حقنة وإبرة رفيعة لإسقاط الماء في القنية ومضخة تفريغ لإزالتها.
2. جلسة تصوير
- استخدم أهداف التكبير المنخفض ومسافة العمل الطويلة للتحقق بصريا من القنية بحثا عن المياه المتبقية والأوساخ والسلامة ووجود التألق.
- قم بمحاذاة القنية مع المحور البصري عن طريق ضبط زوايا أذرع حامل الرأس.
- قم بالتبديل إلى 25X 1.0 NA (فتحة رقمية) أو 4 مم WD (مسافة العمل) أو 40X 0.8 NA ، WD 3 مم ، أهداف الغمر في الماء. أضف كمية كافية من الماء منزوع الأيونات لملء القنية والحفاظ على الماء الزائد فوق القنية. تجنب تكوين فقاعات الهواء.
- استخدم إشارات الإثارة ثنائية الفوتون (2P) وإشارات فلورسنت الصورة.
ملاحظة: يعتمد بروتوكول التصوير بشكل كبير على المقاييس الزمنية والمكانية المراد تصويرها. يرجى الرجوع إلى النتائج التمثيلية للقسم ومناقشتها للحصول على تفاصيل حول إعدادات التصوير التي استخدمناها لإنتاج الصور المعروضة في هذه المقالة.