مراقبة استعادة الخلايا الروضة بين الأعصاب بالليزر في أسماك الزرد باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر

الملخص

المصدر: Volpe, B. A. , et al. {{}} الاستئصال بالليزر القائم على المجهر متحد البؤر وفحص التجديد في الخلايا العصبية بين الزرد. J. Vis. Exp.{{TAG_ 31}} (2020)

} يوضح هذا الفيديو مراقبة استعادة الخلايا المادية بين الأعصاب في أسماك الزرد باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر ، وتتبع موت الخلايا وإصلاحها من خلال التصوير الفلوري بفاصل زمني.

البروتوكول

1. تصوير ما بعد الاستئصال والفحص المجهري بفاصل زمني لدراسة التجديد

النتائج

المواد

<فئة الشكل = 'جدول' >< فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: ثابت ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets-root = '1' data-sheets-baot = '1' > قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات '12-well PTFE Printed SlidesElectron Microscopy Sciences63425-05 15 mM Tricaine stock solutionSigmaE10521 < td style = 'font-family: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ > 15 ملي مولار Tricaine في ماء التناضح العكسي 1X E3 + 600 μM Tricaine تمييع 15 ملي مولار مخزون التريكايين 25X في وسائط 1X E31X E3 media تمييع وسائط 60X E3 إلى 1X في ماء التناضح العكسي (16.7 مل / لتر)60 × E3 mediaجميع المكونات المشتراة من Sigma-Aldrich 34.4 g Nacl, 1.52 g Kcl, 5.8 g CaCl2.2H2O, 9.8 g MgSO4.7H20 in 1 لتر ماء التناضح العكسي Bx60 مجهر مركب مع مضان مصباح قوس الزئبق < td style = 'font-family: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشوة: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>أوليمبوس< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> LSM 700 confocal microscope مزود بليزر 405 نانومتر و 488 نانومتر و 555 أو 561 نانومترCarl Zeiss Microscopy، LLC FIJI/ImageJ Image processing software Downloadable at https://fiji.sc/تشريح إبرة معدلة إلى سكين شعر< td style = 'font-family: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> فيشر العلمي < td style = 'font-family: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ > 19010 تم لصق رمش على نهاية إبرة تشريح بمقبض خشبيMicrosoft Excel softwareMicrosoft Corp. Google sheets is alternative free for Microsoft Excelأطباق زجاجية ذات قاع زجاجي مقاس 35 مم مع غطاء رقم 1.5 ، نافذة 20 مم < نمط TD = 'عائلة الخط: روبوت ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> Mattek Corporation < td style = 'font-family: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشوة: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> P35G-1.5-20-CImmersol 518F Immersion Oil Fisher Scientific12-624-66A Low Gelling AgaroseSigma Life ScienceA9414-256 إدراج Corning Netwell مع شبكة بوليستر 74 um ، إدراج 24 مم < نمط td = 'عائلة الخط: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>Millipore Sigma < td style = 'font-family: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>CLS3479 -48EA< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> Rstudio softwareRstudio PBC< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> Downloadable at https://rstudio.com/SMX-168-BL مجهر ستيريو< td style='عائلة الخط: الروبوت؛ حجم الخط: 7pt؛ وزن الخط: عادي؛ الفائض: مخفي؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل؛ المحاذاة الرأسية: أسفل؛ المساحة البيضاء: عادي؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة؛ استراتيجية التفاف: 4؛ '>Motic نمط نقل الماصةفيشر العلمي13-711-7M ZEN softwareCarl Zeiss Microscopy, LLC