مقالة منهجية

تصوير لويحات الأميلويد بيتا في أقسام أنسجة المخ عن طريق وضع العلامات المناعية وتلوين الكركمين

مايو 29, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: مايتي، ص. وآخرون. al.,. وضع العلامات على لويحات الأميلويد وتصويرها في أنسجة المخ باستخدام البوليفينول الكركمين الطبيعي. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو إجراء تصوير لويحات أميلويد بيتا في أقسام أنسجة المخ باستخدام الملصقات المناعية وتلوين الكركمين. يوفر وضع العلامات المناعية خصوصية للأميلويد بيتا ، بينما يربط الكركمين بشكل انتقائي الألياف الغنية ب β ، مما يعزز التصور. يؤكد التوطين المشترك للتألق الأحمر والأخضر وجود لويحات.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية والطبيب البيطري JoVE لوحة المراجعة.                                                                  

1. نضح

  1. قم بإعداد 0.1 M من فوسفات الصوديوم بإضافة 80 جم من كلوريد الصوديوم (NaCl), 2 غرام من كلوريد البوتاسيوم (KCl), 21.7 غرام من فوسفات الهيدروجين ثنائي الصوديوم (NaHPO4·7H2O), 2.59 g of the potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) والماء المقطر المزدوج ليصبح المجموع 1 لتر.
  3. add 40 جم من paraformaldehyde إلى 1 لتر من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS) (0.1 M، pH 7.4).
  4. NOTE: يجب ألا تتجاوز درجة الحرارة 65 درجة مئوية.
  5. NOTE: الحل جيد لمدة شهر.
  • NOTE: 5x مرض الزهايمر العائلي <نمط الامتداد = 'لون الخلفية: شفاف ؛ اللون: #1a202c ؛ ' >(5×FAD)) تم شراء الفئران الضابطة المطابقة للعمر (ن = 6 لكل مجموعة) من البائعين وتربيتها في بيت بجامعة ولاية وادي ساجينو. تم تأكيد التنميط الجيني عن طريق تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). نمط = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ '>مرض الزهايمر (< نمط الامتداد = 'لون الخلفية: شفاف ؛ اللون: #1a202c ؛ ' >AD) تشمل أنسجة المخ بعد الوفاة وأنسجة التحكم المطابقة للعمر.
    1. تخدير بعامل مخدر مناسب، مثل بنتوباربيتال الصوديوم (390 ملغ/كغ من وزن الجسم)، أو خليط كيتامين/زيلازين (حتى 80 ملغ/كغ من وزن الجسم كيتامين و10 ملغم/كغ من وزن الجسم) عن طريق الحقن داخل الصفاق (27 جم إبرة وحقنة 1 مل). تحقق من مستوى التخدير عن طريق الضغط على إصبع القدم. إذا كان لا يستجيب ، فهو جاهز لجراحة التروية.
    2. ملاحظة: واضح الكبد هو مؤشر التروية المثلى.
    3. NOTE:2. معالجة الأنسجة

      1. انقل الدماغ إلى محاليل السكروز المتدرجة (10٪، 20٪، و 30٪) وخزنها في درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة لكل منهما، حتى الاستخدام.
      2. 3. colocalize cur(curcumin) with Aβ الأجسام المضادة في لويحات Aβ والقلة.

        1. اغسل أقسام cryostat من الخطوة 2.1.2 باستخدام PBS 3x في لوحة 12 بئر.
        2. 594) لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
        3. ملدنات الديستايرين زيلين (< span style = 'لون الخلفية: شفاف ؛ اللون: #1a202c ؛ ' >DPX).

    • الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    المواد

    <فئة الشكل = 'جدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: ثابت ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets - root = '1' data-sheets-baot = '1'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>نموذج حيواني لمرض الزهايمر < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial; حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي. الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل. المساحة البيضاء: عادي. التفاف الكلمات: كلمة فاصلة. التفاف الاستراتيجية: 4 ؛ >مختبر جاكسون ، بار هاربور ، ME < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> نمط < td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial; حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي. الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل. المساحة البيضاء: عادي. التفاف الكلمات: كلمة فاصلة. التفاف الاستراتيجية: 4 ؛ >الكحول المطلق < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>VWR ، Radnor ، PA < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ > < نمط TD = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '>Alexa 594 نمط < td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> الأجسام المضادة 6E10 < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض : مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ >Biolegend ، سان دييغو ، كاليفورنيا < td style = 'background-color: #ffffff ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom; '> antibody A11Millipore ، Burlington ، MA < td style = 'background-color: #ffffff ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ '> < td style = 'background-color: #ffffff ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ '> CryostatGMI, رامزي ، مينيسوتا < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض الزائد: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>LeicaCM1800 < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> CurcuminSigma, سانت لويس ، ميزوري < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو : 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style='لون الخلفية:#ffffff;اللون:#1a202c;عائلة الخط:Arial;حجم الخط:10pt;وزن الخط:عادي;الفائض:مخفي; الحشوة:0px 3px;محاذاة عمودي:أسفل;المساحة البيضاء:عادي;التفاف الكلمة:break-word;wrap-strategy:4;'> ثنائي الصوديوم فوسفات الهيدروجينSigma، St. Louis، MO < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> الملدنات دسترين الزيلينBDH, Dawsonville, GA < td style='لون الخلفية:#ffffff;اللون:#1a202c;عائلة الخط:Arial;حجم الخط:10pt;وزن الخط:عادي;الفائض:مخفي; الحشوة:0px 3px;المحاذاة الرأسية:أسفل;المساحة البيضاء:عادي;التفاف الكلمات:break-word;wrap-strategy:4;'> تصفية الأوراق < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial; حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي. الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل. المساحة البيضاء: عادي. التفاف الكلمات: كلمة فاصلة. التفاف الاستراتيجية: 4 ؛ >مجهر الفلورسنت المقلوب < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> لايكا ، بوفالو جروف ، إلينوي < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial; حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي. الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل. المساحة البيضاء: عادي. التفاف الكلمات: كلمة فاصلة. التفاف الاستراتيجية: 4 ؛ >Leica DMI 6000B المجهر الفلوري المقلوب< td style='لون الخلفية:#ffffff;اللون:#1a202c;عائلة الخط:Arial;حجم الخط:10pt;وزن الخط:عادي;الفائض:مخفي; الحشوة:0px 3px;المحاذاة الرأسية:أسفل;المساحة البيضاء:عادي;التفاف الكلمات:break-word;wrap-strategy:4;'>Olympus, Shinjuku, Japan< td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> أوليمبوس 1 × 70 < نمط td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < نمط tr = 'الارتفاع: 20 بكسل ؛' >مصل الماعز العادي<نمط td ='لون الخلفية:#ffffff;اللون:#1a202c;عائلة الخط:Arial;حجم الخط:10pt;وزن الخط: عادي;الفائض:مخفي; الحشوة: 0px 3px;المحاذاة الرأسية:أسفل;المساحة البيضاء:عادي;التفاف الكلمات:كسر كلمة;التفاف استراتيجية:4;>سيجما ، سانت لويس ، ميزوري < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشوة: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو : 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> Paraformaldehyde< td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ >سيجما ، سانت لويس ، ميزوري < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشوة: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> كلوريد البوتاسيوم < نمط td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ >سيجما ، سانت لويس ، ميزوري < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو : 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial; حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي. الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل. المساحة البيضاء: عادي. التفاف الكلمات: كلمة فاصلة. التفاف الاستراتيجية: 4 ؛ >فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيوم< نمط td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> سيجما ، سانت لويس ، ميزوري < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style='background-color:#ffffff;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> أزيد الصوديوم< td style='background-color:#ffffff;color:#1a202c;font-family:Arial;font-size:10pt;font-weight:normal;overflow:hidden;boardding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Sigma، St. Louis، MO < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> كلوريد الصوديوم < نمط td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ >سيجما ، سانت لويس ، ميزوري < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشوة: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> هيدروكسيد الصوديوم Vortex Pharmaceuticals limited ، ديربورن ، MI < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style='background-color:#ffffff;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> Triton-X-100 < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشوة: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> Xylene < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Arial ؛ حجم الخط: 10pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ >VWR ، Radnor ، PA

    إعادة الطباعة والأذونات

    طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

    طلب إذن

    الوسوم

    مقالات ذات صلة