تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالنماذج الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. تحضير الفأر
-
- قبل 15 دقيقة على الأقل من الحصول على البيانات ، قم بغرس 10٪ قطرات فينيليفرين في عيون الفأر ، وإزالة الفائض ، وغرس 0.5٪ قطرات العين تروبيكاميد.
ملاحظة: يمكن إجراء التوسيع الأول مرة واحدة لجميع الفئران التي سيتم اختبارها في الجلسة. تأكد من أن السوائل في درجة حرارة الغرفة. - مباشرة بعد التخدير العام (الخطوة 1.2) ، قم بإعطاء قطرات العين 0.4٪ أوكسي بوبروكائين هيدروكلوريد ، مع الاحتفاظ بها في مكانها لمدة 3 ثوان لتخدير العينين وشل حركتها. بعد ذلك ، امسح القطرات وكرر تقطير 10٪ فينيليفرين و 0.5٪ تروبيكاميد للتأكد من أن العينين متوسعة جيدا.
ملاحظة: تأكد من أن السوائل في درجة حرارة الغرفة وأن الفأر لا يبتلع الأوكسي بوبروكايين.
- التخدير العام
- تحضير محلول مخدر من الكيتامين (20 ملغم/مل) والزيلازين (1.17 ملغم/مل) في محلول ملحي. يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة أقصاها أسبوعين.
- قبل الاختبار بحوالي 5 دقائق ، يتم حقن 5 - 10 ميكرولتر من محلول التخدير داخل الصفاق لكل 1 غرام من كتلة الجسم ، اعتمادا على عمر وحجم الفأر.
ملاحظة: تحتاج الفئران الصغيرة و / أو الرقيقة إلى تخدير أقل ، وتستغرق وقتا أقل للتخدير ، ولكنها تستيقظ أيضا بشكل أسرع. هنا ، 8 ميكرولتر / غرام (160 مجم / كجم من الكيتامين ، 9.33 مجم / كجم من الزيلازين). - اختياريا ، قم بتليين العينين بقطرات العين اللزجة أو جل العين لتجنب جفاف القرنية.
2. وضع الفأر
- قم بتليين العينين بقطرات العين اللزجة القائمة على الجليكول لتوفير ترطيب القرنية.
ملاحظة : إذا بدت العينان جافة أثناء الفحص ، فأعد وضع قطرات العين. - لف الماوس بورقة من الشاش الجراحي لإبقائه دافئا.
- باستخدام إسفنجة أو فتيل قطني ، ضعي طبقة رقيقة من جل العيون مع 0.3٪ هيبروميلوز على كل عين ، لتقليل انكسار الضوء وتجنب التعتيم وتأمين ترطيب القرنية. أثناء القيام بذلك ، حرك الرموش والشعيرات جانبا.
- ضع الماوس في الكاسيت، بحيث يكون الرأس مستقيما وموجها للأمام.
- افتح مشبك شريط العض برفق وضع الشريط في الفم ؛ استخدم شريط الأنف لتأمين الموضع.
ملاحظة: تأكد من أن شريط العض في منتصف الكاسيت. - ضع لفافة قطن أسفل الجانب الأيمن (الأيسر) إذا تم اختبار العين اليمنى (اليسرى).
- مع الاحتفاظ بطرف التصويب المثبت على الفتحة الخاصة بالماوس ، قم بإحضاره نحو العين عن طريق تدوير برغي Z-translator عكس اتجاه عقارب الساعة.
- عن طريق تدوير الكاسيت وتدويره وتدوير شريط العض ومسامير X-translator ، قم بتعيين موضع الماوس مسبقا ؛ الهدف هو جعل العين اليمنى تنظر مباشرة إلى العدسة ، وبالتالي محاذاة المحاور البصرية للعين والعدسة.
ملاحظة: إذا كان الماوس مرتفعا جدا أو منخفضا جدا ، فيجب استخدام برغي المترجم Y أولا. - اختر الفحص الأول في "الاختبار" ، وانقر فوق "بدء التصويب" ، وقم بإجراء أي تعديلات يدوية أخرى لتصوير الشبكية.
- باستخدام برغي المترجم Z، حرك شبكية العين عموديا على اللوحة اليسرى ( الشكل 1، محاذاة المسح B الأفقية) وأفقيا على اللوحة اليمنى ( الشكل 1، محاذاة المسح B الرأسية).
- قم بتدوير الكاسيت لإحضار ONH في منتصف اللوحة اليمنى عن طريق تحريك ONH لأعلى أو لأسفل. استخدم برغي قضيب العض لتصويب شبكية العين على اللوحة اليمنى. قم بتدوير الدرج لوضع ONH في منتصف اللوحة اليسرى.
- استخدم برغي X-translator لتسوية شبكية العين على اللوحة اليسرى. مع الأخذ في الاعتبار الوظيفة الرئيسية لكل معدل ، اضبط موضع شبكية العين بشكل أكبر لمركزية ONH.
ملاحظة: استخدم برغي المترجم Y لتحريك ONH لأعلى ولأسفل على اللوحة اليمنى، إذا لزم الأمر. يمكن تحسين الموضع في أي وقت بين عمليات الفحص.
3. تصوير SD-OCT ل ONH وشبكية العين
- بمجرد الاكتفاء بالتعديلات ، انقر فوق "بدء لقطة" لبدء فحص SD-OCT.
- إذا لم يكن التصوير ثلاثي الأبعاد مطلوبا ، فقم بإلغاء تحديد خيار OCU.
- احفظ الفحص والتقرير.
- تابع عمليات الفحص التالية.
- لتصوير العين الثانية ، بعد سحب العدسة ، أدر الكاسيت وفقا لذلك وكرر الخطوات 2.6 - 3.3.
4. اكتمال الاستحواذ
- عند اكتمال الاستحواذ ، قم بإزالة الماوس من الكاسيت ، ووضع جل العيون مع 0.3٪ هيبروميلوز على كل عين ، وضع الماوس على لوح تسخين للاستيقاظ.
- بعد آخر عملية استحواذ ، أغلق البرنامج وقم بإيقاف تشغيل الكمبيوتر وجهاز OCT (زر إمداد الطاقة).
- نظف الكاسيت بمطهر.
5. التحليل
- لقياس سمك طبقة الشبكية، استخدم برنامج التجزئة الآلي الذي توفره الشركة المصنعة.
- انقر فوق "المريض" ، واختر قائمة "الاختبار" المطلوبة ، وانقر على خيار "مراجعة الاختبار".
- قم بتحميل بيانات OCT المطلوبة على برنامج OCT عن طريق النقر بزر الماوس الأيمن على رمز المجلد في الفحص المطلوب.
- انقر بزر الماوس الأيمن على المسح الضوئي B. تكوين الفرجار من خلال تمكين ما يصل إلى 10 ملاقط قياس ؛ وأدخل أسمائها وزواياها وألوانها
- اختيار الفرجار المطلوب عن طريق النقر بزر الماوس الأيمن على B-scan; ضعه وفقا لذلك على شبكية العين للقياس.
ملاحظة: بالنسبة لعمليات المسح المتمركزة على ONH ، ضع 5 فرجار على كل جانب منها ، على مسافة متساوية من بعضها البعض. لتحليل الحليمة المحيطة ، تأكد من عدم وضع الفرجار بعيدا جدا عن ONH. للمسح الضوئي الشعاعي ، قم بتحليل 10 صور لكل مسح تم اختيارها بواسطة برنامج OCT. يمكن العثور على أرقامهم في مجلد "التقارير". - احفظ النتائج للتحليل في برنامج جداول البيانات عن طريق النقر بزر الماوس الأيمن على المسح الضوئي B والنقر فوق "حفظ النتائج".
ملاحظة: يمكن العثور على النتائج في نفس المجلد مثل بيانات المسح.
- بدلا من ذلك ، استخدم ماكرو الفرجار محلي الصنع ، "أداة MRI Retina Tool" ، التي تم تطويرها لبرنامج معالجة الصور مفتوح المصدر (انظر جدول المواد).
- تأكد من أن وحدات الماكرو "MRI Retina Tool" و "Modify Polygon Section Tool" نشطة. قم بتحميل الصورة. انقر فوق الزر m لبدء القياس.
ملاحظة: يقوم الماكرو تلقائيا بإنشاء شريط قياس واحد بطول 0.2 مم على جانبي ONH. يحتوي كل كاسيت على 5 نقاط قياس تعمل كفرجار. موضعها الجانبي غير قابل للتغيير ويتم تخصيصه للحليمة المحيطة في عمليات المسح الشعاعية. تم تحديد الموضع الأفقي للأشرطة مسبقا لقياس سمك RNFL / GCL ، ولكن يمكن تعديله بسهولة لقياس طبقة GC المعقدة بدلا من ذلك. إذا كانت جودة المسح رديئة ، فيجب ضبط الوضع الأفقي ، أو يجب استبعاد الصورة من التحليل. - للضبط الأفقي ، انقر فوق الزر e. في نافذة "مدير عائد الاستثمار" المفتوحة حديثا ، اختر الكاسيت الأول.
- انقر فوق زر المضلع الأزرق واضبط موضع الكاسيت الأول بالنقر فوق حدود الطبقة المقاسة في الصورة.
- كرر مع الكاسيت الثاني عن طريق اختياره أولا في نافذة "ROI Manager" ثم النقر فوق الصورة المناسبة. انقر فوق الزر r لإعادة القياس. عرض النتائج في نافذة "القياسات".
ملاحظة: يمكن نسخ النتائج إلى برنامج جداول بيانات في أي وقت. تحتوي على القيم التالية للكاسيت الأيمن (r) والكاسيت الأيسر (l) والإجمالي: Intden - كثافة متكاملة داخل الكاسيت ؛ المنطقة: مساحة القياس ، بالملم 2 ؛ لين: طول الفرجار داخل الكاسيت ، بالملم ؛ المتوسط: متوسط شدة الإشارة داخل الكاسيت؛ و Std: الخطأ المعياري لمتوسط شدة الإشارة. - تابع الصورة التالية.
- قم بتحليل البيانات بشكل أكبر في برنامج جداول البيانات.
ملاحظة: للعثور على متوسط سمك الطبقة ، خذ قيم لين العشر.