التصوير المصغر المحسن بالتباين بالتصوير المقطعي المحوسب لآفات التشوه الكهفي الدماغي في دماغ الفأر

الملخص

المصدر: تشوي، ج. ب. وآخرون. التحريض والتصوير المقطعي المحوسب للتشوهات الكهفية الدماغية في نموذج الفأر. J. Vis. Exp. ( 2017)

} يوضح هذا الفيديو استخدام التصوير المقطعي المحوسب الدقيق لتصور آفات التشوه الكهفي الدماغي (CCM) في دماغ الفأر. يوضح بالتفصيل خطوات تحضير العينة والتصوير وإعادة بناء الصور ثلاثية الأبعاد لتقييم كثافة وموقع آفات CCM في أنسجة المخ.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تحضير عينة لفحوصات التصوير المقطعي المحوسب الدقيق (CT)

1. القتل الرحيم للصغار حديثي الولادة في P8 عن طريق الاختناق بثاني أكسيد الكربون.
2. إجراء التروية داخل القلب عن طريق إدخال إبرة قياس 29 مع 3 مل من 2٪ بارافورمالدهيد في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) في حقنة سعة 10 مل في بطين قلب الفأر.
   تنبيه: بارافورمالدهيد سام. ارتداء الحماية المناسبة.
3. افصل الرأس عن الجسم باستخدام المقص. قم بإزالة كل الجلد من الرأس باستخدام مقص وقشر الجمجمة باستخدام ملقط لتشريح الدماغ كله.
4. التقط صورا للدماغ باستخدام مجهر مجسم بتكبير 7.82x ، وكسب 1x ، و 0.6 جاما ، و 20 مللي ثانية من وقت التعريض.
5. قم بإصلاح الأدمغة التي تم تشريحها باستخدام 4٪ بارافورمالدهيد في محلول PBS بين عشية وضحاها.
   تنبيه: بارافورمالدهيد سام. ارتداء الحماية المناسبة.
6. في اليوم التالي ، افصل الدماغ الخلفي باستخدام الملقط واغسله بمحلول PBS.
7. احتضان الأدمغة الخلفية في محلول اليود في Lugol لمدة 48 ساعة.
8. بعد الحضانة ، جفف الدماغ الخلفي بالهواء لفترة وجيزة لإزالة محلول اليود الزائد من Lugol.
9. قم بتعبئة الدماغ الخلفي الملطخ باليود في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة سعة 0.65 مل وأغلقها تماما بغشاء البارافين البلاستيكي لتجنب انكماش الأنسجة ( الشكل 1 أ ).
10. ضع أنابيب الطرد المركزي الدقيقة في أنابيب بلاستيكية سعة 5 مل مع إسفنج لمنعها من الحركة أثناء المسح ( الشكل 1 ب ).

2. الفحص المصغر بالأشعة المناوية للتشوهات الكهفية الدماغية (CCMs) في دماغ الفأر

1. قم بتركيب الدماغ الخلفي رأسيا معبأ في أنبوب على حامل من الألومنيوم في نظام التصوير المقطعي المحوسب.
2. اضبط معلمات المسح الضوئي على 540 إسقاطا ووقت تعريض ضوئي 2 ثانية مع ظروف المصدر 50 كيلو فولت و10 وات للحصول على مجموعات البيانات المقطعية (دقة الصورة 9.5 ميكرومتر/بكسل).
3. يتم إعادة بناء الصور الشعاعية من الفحص تلقائيا بواسطة برنامج إعادة بناء الإسقاط القائم على الأجهزة الذي يوفره نظام التصوير المقطعي المحوسب الصغير ، مما ينتج عنه سلسلة صور من الشرائح المحورية 16 بت (ملف "TXM").

3. تحليل مجموعات بيانات التصوير المقطعي المحوسب الدقيق

1. افتح ملف الصورة المعاد بناؤه (ملف "TXM") في برنامج التحليل ثلاثي الأبعاد وتصور الدماغ باستخدام وظيفة "عرض الحجم".
2. قم بتحويل الدماغ الخلفي إلى الاتجاه المطلوب باستخدام وظائف "المربع المحيط" و "مستوى القطع".
3. أعد تشكيل الصورة المحولة في الوضع الموسع وحافظ على حجم فوكسيل.
4. قم بإنشاء "تحرير حقل تسمية جديد" على الصورة المحولة (3.3) وقم بتمييز الدماغ الخلفي فقط باستخدام كثافة التدرج الرمادي.
5. أضف المناطق المميزة وقم بتشغيل "تحليل التسمية" للحصول على قياسات للدماغ الخلفي بأكمله ( أي ، الحجم الإجمالي والمساحة). تصدير القياسات في ملف Excel.
6. تصور الدماغ الخلفي باستخدام وظيفة "تجسيد متساوي السطح".
7. قم بإنشاء "تحرير حقل تسمية جديد" آخر على الصورة المحولة وقم بتمييز المناطق ذات الآفات باستخدام كثافة التدرج الرمادي.
8. أضف المناطق المميزة وقم بإجراء تحليل "التسمية" للحصول على قياسات للآفات داخل الدماغ الخلفي ( أي ، الحجم الإجمالي والمساحة). تصدير القياسات في ملف Excel.
9. تصور الآفات باستخدام وظيفتي "توليد السطح" و "عرض السطح".
10. التقط صور الدماغ الخلفي في الاتجاهات المرغوبة أو قم بإنشاء فيلم للتصور ثلاثي الأبعاد للآفات.

النتائج

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: fixed ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets root = '1' data-sheets basat = '1' >قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 4-hydroxy tamoxifenSigma-AldrichH6278to activate Cdh5-CreErt2Corn-oilSigma-AldrichC8267-500MLto dilute 4-hydroxy tamoxifenStereoscopeLeicaM205FATo taking images macroscopic < td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Lugol's Iodine SolutionSigma-AldrichL6146to stain samples for micro-CTفيلم البارافين البلاستيكي < نمط TD = 'الحد السفلي: 1 بكسل صلب # 000000 ؛ الحدود اليمنى: 1 بكسل صلب # 000000 ؛ الفائض : مخفي ؛ الحشو : 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '>Parafilm < td style = 'border-bottom: 1px solid # 000000 ؛ border-right: 1px solid # 000000 ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom;'>PM992 للحزمة samplesMicro-CTXradiaMicroXCT-400Micro-CTبرنامج عرض ثلاثي الأبعاد< نمط td = 'border-bottom: 1px solid # 000000 ؛ border-right: 1px solid # 000000 ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom;'>FEI Visualization Science group< td style = 'border-bottom: 1px solid # 000000 ؛ border-right: 1px solid # 000000 ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ '>Avizo 3D image processing software < td style ='border-bottom: 1px solid # 000000; الحدود اليمنى: 1 بكسل صلبة # 000000 ؛ الفائض: مخفي. الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ >لتحليل الأشعة المقطعية الدقيقة