التصوير المزدوج الفلوري لتحديد الخلايا قليلة التغصن المتمايزة

الملخص

Source: Schott ، JT ، et al. تحضير ثقافات سلف الخلايا قليلة التغصن للفئران والقياس الكمي لتكوين الدبقية قليلة التغصن باستخدام المسح الضوئي المضان بالأشعة تحت الحمراء المزدوجة. J. Vis. Exp. (2016).

يوضح هذا الفيديو استخدام التصوير المضان المزدوج لتقييم تمايز الخلايا قليلة التغصن عن الخلايا السليفة (OPCs) معزولة عن دماغ جرو الفئران. تتضمن العملية إصلاح الخلايا ، ووضع علامات على علامات محددة بالأجسام المضادة الثانوية الأولية والمرافقة بالفلوروفور ، وتصورها باستخدام التصوير الفلوري. يتم تحديد الخلايا قليلة التغصن المتمايزة التي تعبر عن كل من بروتين المايلين الأساسي (MBP) وعامل نسخ الخلايا قليلة التغصن 2 (Olig2) ، مما يميزها عن الخلايا السليفة غير المتمايزة التي تعبر عن Olig2 فقط.

البروتوكول

1. إعداد لوحات الفحص ، وحلول المخزون ، ووسائط OPC الأساسية

المواد

<فئة الشكل = 'جدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: ثابت ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets-root = '1' data-sheets-baot = '1' >style = 'width: 25٪;' width = '306'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Culture MaterialsPDGF-AAPeproTech Inc100-13A20ng/mLdimethyl sulfoxideSigma-AldrichD2650Hybri-Max 100 mL< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Triiodothyronine Sigma-AldrichT639745 nMClemastine fumarate saltSigma-AldrichSML0445-100MG1 μMQuetiapine hemifumarate saltSigma-Aldrich<td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>Q3638-10MG1 μMN-acetyl cysteineSigma-AldrichA9165<td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>5 μg / mLProgesteroneSigma-AldrichP8783< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>60 ng/mLPoly-L-lysineSigma-AldrichP152410 μg / mLPutrecineSigma-AldrichP750516 μg / mL Sodium SeleniteSigma-AldrichS526140 ng/mLHydrocortisoneSigma-AldrichH013550 ng/mLd-BiotinSigma-AldrichB4639< td style = 'الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛'>الأنسولين < td النمط = 'الفائض: مخفي ؛ الحشوة: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> Sigma-Aldrich < td style = 'overflow: hidden؛ padding: 0px 3px؛ vertical-align: bottom;'>I66345 μg / mLApo-TransferrinSigma-AldrichT1147100 μg / mL Bovine Serum AlbuminSigma-AldrichA4161100 μg / mLTrace Elements BCorning25-022-Cl1 x B-27 SupplementLife Technologies175040441 x Penicillin/StreptomycinLife Technologies151401221 x DMEMLife Technologies11995-0651 x -24-well Black Visiplate with coverPerkin Elmer1450-605Pattern Culture Grade Immunocytocytochemistry and QuantificationPFASigma-Aldrich100-13A4٪Triton X-100Sigma-Aldrich787870.10٪Normal Goat SerumJackson Immuno Research005-000-1215٪ monoclonal anti-MBPBiolegendSMI-99P< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>1:1000 Dilutionrabbit polyclonal anti-ActinSanta Cruz BiotecnologySC-72101:200 Dilutionالأرنب متعدد النسيلة مضاد للأوليغ 2 < td النمط = 'الفائض: مخفي ؛ الحشو : 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛'>Millipore < td style = 'overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ '>AB9610 < td style = 'overflow: hidden؛ padding: 0px 3px؛ vertical-align: bottom;'>1: 1000 Dilutiongoatgoat anti-mouse 680RDLicor926-680701:500 Dilutiongoatgoat anti-rabbit 800CWLicor926-322111:500 DilutionAlexa Fluor 594 goat oy-mouse styleLife TechnologiesA110321:000 dilutionAlexa Fluor 488 goat goat anti-rabbitLife TechnologiesA11008< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>1:000 dilution إطالة الذهب المضاد للتلاشي مع DAPILife TechnologiesP36931 DPBS with Ca2+ and Mg2+Corning21-030-CV< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> Licor Odyssey Clx Infared Imaging SystemLicor