قياس تعبير البروتين في دماغ القوارض باستخدام التألق بالأشعة تحت الحمراء القريبة والمسح عالي الدقة

الملخص

Source: Kimmelmann-Shultz، ب. ، et. al. using meditation near infrared والمسح الضوئي عالي الدقة لقياس تعبير البروتين في دماغ القوارض. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو طريقة مسح ضوئية قريبة من الأشعة تحت الحمراء وعالية الدقة لقياس تعبير البروتين في دماغ القوارض.

البروتوكول

1. التصوير

2. تستخدم شرائح الصورة إعداد أعلى جودة مع إزاحة 0 نانومتر ودقة 21 ميكرومتر. سيستغرق المسح عادة من 13 إلى 19 ساعة ، اعتمادا على معدات المسح المستخدمة.

3. استيراد الصور إلى برنامج تحليل الصور (على سبيل المثال، Image Studio) لعرض البروتين شبه الكمي ووضع علامة عليه تحليل.

2. تحليل تعبير البروتين

< نمط p = 'ارتفاع الخط: 1.2 ؛ هامش أسفل : 0pt ؛ margin left: 28.35pt ؛ margin-top: 0pt ؛ text-align: justify ؛ dir = 'ltr' >1. افتح برنامج تحليل الصور وحدد منطقة العمل 2. افتح الصورة الممسوحة ضوئيا في برنامج تحليل الصور لعرض المسح الضوئي، واضبط الأطوال الموجية التي يتم عرضها أيضا. كما يظهر التباين والسطوع والتكبير دون تغيير الصورة الأولية أو إجمالي الانبعاث الكمي.

3. حدد المناطق الرئيسية للقياس الكمي وحدد Analysis tab along the top page, then select Draw Rectangle (or Draw Ellipse/ Draw Freehand) لرسم مستطيل فوق المنطقة التي سيتم تحديدها كميا. style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-left:28.35pt;margin-top:0pt;text-align:justify;' dir='ltr'>4. لعرض حجم المستطيل ، حدد الأشكال < نمط الامتداد = 'عائلة الخط: Arial ، sans-serif ؛ حجم الخط: 12pt ؛ نمط الخط: عادي ؛ متغير الخط: عادي ؛ وزن الخط: 400 ؛ زخرفة النص: لا شيء ؛ المحاذاة الرأسية: خط الأساس ؛ المسافة البيضاء: التفاف مسبق ؛ > على طول الجزء السفلي الأيسر من الشاشة ، ثم حدد Columns along down right. إضافة Height and Width columns لتحديد حجم الشكل.

NOTE: من المهم التحكم في حجم الشكل عند مقارنة القياس الكمي. يوصى باستخدام أشكال متطابقة موضوعة داخل موقع القياس الكمي المطلوب ، من أجل الحصول على عينة دقيقة من الانبعاثات لتلك المنطقة.

الأعمدة <نمط span = 'font-family: Arial ، sans-serif ؛ حجم الخط: 12pt ؛ نمط الخط: عادي ؛ متغير الخط: عادي ؛ وزن الخط: 400 ؛ زخرفة النص: لا شيء ؛ المحاذاة الرأسية: خط الأساس ؛ المسافة البيضاء: التفاف مسبق ؛ علامة التبويب > يمكن أن تكون مجمعة وتحليلة.

المواد