مقالة منهجية

تصوير مباشر للنشاط الهدبي للخلايا البطانية في قسم دماغ الفأر

مايو 29, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: العمران، إيه ج.، . التصوير الحي للأهداب البطانية البطينية في البطينين الجانبيين لدماغ الفأر. J. Vis. Exp. (2015).

يوضح هذا الفيديو تقنية التصوير المباشر باستخدام الفحص المجهري لتباين التداخل التفاضلي (DIC) لمراقبة ضربات الأهداب البطانية العصبية في أقسام دماغ الفأر السهمية. تدفع الأهداب الظفارية السائل الدماغي النخاعي (CSF) ، ويتم تسجيل نشاطها في أقسام الدماغ المحفوظة في وسط غني بالمغذيات ويتم تصويرها في غرفة يتم التحكم فيها بالمناخ. تتيح مقاطع الفيديو عالية التباين تحديد الأهداب الوظيفية وتحديد تردد ضربها.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات من والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. استخراج الدماغ والتقطيع وإعداد الأنسجة

  1. التضحية بسلالة الفأر البرية C57BL / 6 عن طريق القتل الرحيم بعمق باستخدام ثاني أكسيد الكربون الاختناق لمدة 5 دقائق. ضمان الموت عن طريق خلع عنق الرحم.
  2. نظف رأس الماوس بنسبة 70٪ من الإيثانول.
  3. قم بإجراء استئصال الجرافة باستخدام مقص وملقط معقم عن طريق سحب الجلد أولا ، بدءا من الجزء العلوي من الرأس لكشف الجمجمة.
  4. بعد ذلك ، عندما تنكشف الجمجمة ، قم بإزالة الجمجمة عن طريق تقشير العظم قطعة قطعة ، بدءا من الجانب الخلفي والانتقال نحو الجانب الأمامي. كن حذرا حتى لا تدمر بطينات الدماغ.
  5. اجمع الدماغ كله.
  6. ضع الدماغ في طبق بتري مقاس 100 مم يحتوي على Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) / عالي الجلوكوز مكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 10٪ (FBS) و 1٪ من محلول البنسلين / الستربتومايسين الذي يحتوي على 10,000 وحدة / مل من البنسلين و 10,000 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين وتسخينه مسبقا إلى 37 درجة مئوية.
  7. قم بتقطيع الدماغ على المستوى السهمي المتوسط يدويا باستخدام شفرة حادة ، واستخدم اهتزاز للحصول على أول قسم 100-200 مم من كل نصف.
  8. اشطف أنسجة المخ بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات 37 درجة مئوية (1x PBS) مسخن مسبقا.
  9. ضع قسم الدماغ على الفور في وسائط DMEM/High-Glucose التي تم تسخينها مسبقا إلى 37 درجة مئوية.

2. تكوين وإعداد التصوير المباشر

  1. ضع أقسام أنسجة المخ في أطباق مزرعة زجاجية مقاس 30 مم تحتوي على 1 مل من وسائط DMEM/عالية الجلوكوز. اضبط بيئة الغرفة المغلقة في المجهر على 37 درجة مئوية ، 95٪ / 5٪ O 2 / CO2{ محتوى ({ الشكل 1).
  2. باستخدام عدسة غمر بالزيت الموضوعية 60X ، اجمع صور الخلايا البطانية العصانية / الأهداب عن طريق وضع قطرة زيت على العدسة الموضوعية 60X والتركيز على الخلايا ذات الضوء المنقول لتباين التداخل التفاضلي المنتظم (DIC).
  3. بعد ذلك ، اتبع اتجاه حركة فقاعة DMEM كدليل لموقع الأهداب البطانية العصبية المتحركة حيث تخلق الضربات الهدبية نوعا من حركة الفقاعات في المنطقة. اختر منطقة تحتوي على خلايا سليمة ذات أهداب متحركة في البطين الجانبي للدماغ باستخدام مرشح DIC. بمجرد العثور على الأهداب البطانية العصبية ، اضبط الضوء والتركيز للحصول على صورة مرضية.
  4. باستخدام برنامج تصوير Metamorph ، قم بتعيين معلمات التصوير المباشر وفقا لغرض معين. في العرض التوضيحي الحالي ، احصل على صور أربعة وعشرين بت مع ضبط تجميع الكاميرا على 1 × 1 جنبا إلى جنب مع هدف 60X ووقت تعريض 5-10 مللي ثانية.
  5. اجمع صور DIC عن طريق فتح فتحة المجهر إلى المستوى الأمثل لأقل وقت تعريض ضوئي. راقب الصور الحية التي يتم بثها إلى الكاميرا لتوفير الحصول على الصور بسرعة وفورية دون تأخير. احسب سرعة ضرب الأهداب بناء على متطلبات الحد الأدنى من أوقات التعريض الضوئي للحصول على تباين كاف في الصورة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

<فئة الشكل = 'جدول' >< فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: ثابت ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets root = '1' data-sheets-baot = '1'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات DMEM / HIGH GLUCOSECellgro Mediatech Inc.10-013-CV < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>مصل الجنين البقري (FBS) < نمط td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> هيكلونSH30088-03 < td style='لون الخلفية:#ffffff;اللون:#1a202c;الفائض:مخفي;الحشوة:0px 3px;المحاذاة الرأسية:أسفل;المساحة البيضاء:عادي;التفاف الكلمة:break-word;wrap-strategy:4;'>Penicillin / StreptomycinThermo Scientific< td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>SV30010 < نمط td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ '> <tr style = 'الارتفاع: 20 بكسل ؛'>< td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> محلول ملحي مخزن بالفوسفات < نمط td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ > علمي حراريSH30256-01 الاهتزاز < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>Leica Biosystems < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> Leica VT1200S < td style = 'overflow: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛'> Cell Culture plateVWR Vista Vision30-2041Inverted Fluorescence MicroscopeNikonNikon TE200060X oil

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة