الفحص المجهري ثنائي الفوتون لتصوير مورفولوجيا الخلايا العصبية في جرو الفأر

الملخص

Source: Mizuno, H., et al. In Vivo تصوير ثنائي الفوتون للخلايا العصبية القشرية في الفئران حديثي الولادة. J. Vis. اكسب. (2018)

يعرض هذا الفيديو الفحص المجهري ثنائي الفوتون الذي يستخدم لتصوير الخلايا العصبية في دماغ جرو فأر معدلة وراثيا مخدر. يسمح ليزر الفوتون ثنائي الفوتون بتصوير أعمق بدقة مكانية عالية والحد الأدنى من تشتت الضوء ، مما يتيح التقاط مفصل لمورفولوجيا الخلايا العصبية ، بما في ذلك الإسقاطات المتغصنة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية والطبيب البيطري JoVE مراجعة المجلس.

1. Cranial Window Preparation

1. تخدير الجرو باستخدام isoflurane (1.0٪ - 2.0٪) وتحقق من مستوى التخدير عن طريق اختبار قرص الذيل.
2. الشكل 1C₂, and 2 mmol/L MgSO₄; pH 7.4; 300 mOsm/L; temperature) لوقف النزيف. عند فتح الجمجمة ، ضع عازلة للقشرة للحفاظ على رطوبة سطح الدماغ.
3. NOTE: الشكل 1D 1E). style='لون الخلفية:شفاف;اللون:#1a202c;font-family:Roboto,sans-serif;font-size:12pt;font-style:عادي;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>الشكل 1F). style='لون الخلفية:شفاف;اللون:#1a202c;font-family:Roboto,sans-serif;font-size:12pt;font-style:عادي;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>الشكل 1Gالشكل 1H). style='لون الخلفية:شفاف;اللون:#1a202c;font-family:Roboto,sans-serif;font-size:12pt;font-style:عادي;font-variant:normal;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>2. تصوير فوتونين
   NOTE: the laser power يجب تقليلها مع تحرك الموضع Z لأعلى.
   1. الشكل 2 أ and 2B). اضبط الرأس بحيث يكون الغطاء موازيا للعدسة الموضوعية باستخدام مرحلة مقياس الزوايا (الشكل 2BNOTEالشكل 2 ب and 2C).
   2. الشكل 2D2ENOTE:

النتائج

فئة الشكل = 'صورة image-style-align-center image_resized' style = 'display: table ؛ margin-left: auto ؛ margin-right: auto ؛ width: 75٪ ؛ '>

الشكل 1: الجراحة ، نافذة الجمجمة تحضير ومرفق شريط التيتانيوم. (أ) توضح هذه اللوحة إزالة ا...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
pK031. TRE-Cre	المؤلفون	-	متاح من RIKEN BRC و Addgene
pK029. CAG-loxP-STOP-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE	المؤلفون	-	متاح من RIKEN BRC و Addgene
pK273. CAG-loxP-STOP-loxP-CyRFP-ires-tTA-WPRE	المؤلفون	-	TAG_37
Isoflurane	Wako	09 9-06571
410 وحدة التخدير (آلة غاز الأيزوفلوران)	Univentor	8323101
Vetbond (لاصق الأنسجة)	3M	084-1469SB
MμltiFlex Round (loading tip)	Soren son	13810
Gelfoam (إسفنج جيلاتين)	Pfizer	09-0353-01	& #160;
Agarose	Sigma	A9793	TAG_97
غطاء دائري الشكل	ماتسونامي	-{{}}{{} {TAG_105}}	صنع مخصص
Unifast 2 (أسمنت الأسنان)	GC	-
المؤلفون	-	صنع حسب الطلب (انظر الشكل 1G)
Rimadyl (carprofen)	Zoetis	-
مجهر ثنائي فوتون	Zeiss	LSM7MP
ليزر التيتانيوم	Spertra-Physics	Mai-Tai eHPDS
لوحة التيتانيوم	المؤلفون	-	صنع حسب الطلب (انظر الشكل 2 أ)
IMARIS, FilamentTracer, MeasurementPro	BITPLANE
Goniometer stage	Thorlabs	GN2/m

{{TAG_ 59}}{{ TAG_120}}شريط التيتانيوم} {{TAG_ 148}}}