التصوير الحيوي للدراسة عابرات الكالسيوم في ذبابة الفاكهة في هياكل الدماغ

الملخص

المصدر: Lark, A. R., }et. al., في الجسم الحي نهج تصوير الدماغ الوظيفي استنادا إلى مؤشر الكالسيوم الحيوي GFP-aequorin. J. Vis. Exp. (2016)

{{}}{{}}{{}}{{}}{{}}{{}}{{}}}{{}}{{}}{{}}{{}}{{}}{{}}{{}}}{{}}{{}}{{}}{{}}{{}}{{}}{{}}}{{}}{{}}{{}}{{}}} يوضح هذا الفيديو التصوير في الوقت الفعلي لديناميكيات الكالسيوم باستخدام اللون الأخضر التلألؤ البيولوجي للبروتين الفلوري - الأيكورين في ذبابة الفاكهة هياكل الدماغ العميقة.

البروتوكول

1. تصوير

اعداد
1. ابدأ نظام التسجيل عن طريق تشغيل المجهر والكمبيوتر والكاميرا ونظام الصرف وضبط عناصر التحكم البيئية في الغرفة على 25 درجة مئوية. style='لون الخلفية:شفاف;اللون:#1a202c;عائلة الخط:Arial,sans-serif;حجم الخط:12pt;نمط الخط:عادي;متغير الخط:عادي;وزن الخط:400;نوع نمط القائمة:عشري;زخرفة النص:لا شيء;محاذاة عمودي:خط الأساس;المسافة البيضاء:pre;' dir='ltr' aria-level='2'>Prepare sample
   1. ضع طبق كتلة حامل التصوير على الحامل تحت المجهر بتكبير 5X وأدخل أنبوب التروية في القناة من خلال الثقب. style='لون الخلفية:شفاف;اللون:#1a202c;عائلة الخط:Arial,sans-serif;حجم الخط:12pt;نمط الخط:عادي;متغير الخط:عادي;وزن الخط:400;نوع نمط القائمة:عشري;زخرفة النص:لا شيء;محاذاة عمودي:خط الأساس;المسافة البيضاء:pre;' dir='ltr' aria-level='2'>Recording style='هامش أسفل:0;الهامش العلوي:0;padding-inline-start:48px;'>
   2. اضبط سرعة الفوتون على سرعة التسجيل المطلوبة (من 50 مللي ثانية حتى 1 ثانية أو أكثر). حدد وضع الفوتون وافتح الغالق. سجل النمط الجيني والجنس والعمر ورقم العينة في إدخالات السجل. اضبط موضع صناديق ROI (منطقة الاهتمام) على أجسام الكأس والخلايا (CCB) والفصوص الإنسية بالنقر فوق مربعات عائد الاستثمار والسحب أثناء الضغط على التحكم.

المواد

<فئة الشكل = 'جدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: fixed ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets root = '1' data-sheets-baot = '1'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td style = 'overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ white-space : normal ؛ word-wrap: break-word؛ wrap-strategy: 4 ؛ '> كلوريد الصوديوم < td style = 'overflow: hidden؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ white-space: normal ؛ word-wrap: break-word؛ wrap-strategy: 4 ؛ '>Sigma-AldrichS3014< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> كلوريد الكالسيومMerck1023911000< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> HEPESSigma-Aldrich7365-45-9< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> Potassium كلوريد البوتاسيومProlabo26 764.298< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> Magnesium chlorideProlabo25 108.295< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> SucroseSigma-AldrichS0389< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> NicotineSigma-AldrichN3876< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> ATPSigma-AldrichA2383< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Adenosine 5′-triphosphate ثنائي الصوديوم ملح هيدراتBenzyl-coelenterazineProlume, nanolightCat #301 Coelenterazine hhttp://www.prolume.com/tips pipette<نمط td = 'الفائض: مخفي ؛ الحشو : 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> Corning Incorporated< td style = 'الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المسافة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> 4868 < td style = 'الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> 100-1000 ميكرولتر طرف ماصة أحادي < نمط tr = 'الارتفاع: 21 بكسل ؛' >< td style = 'overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ white-space: normal ؛ word-wrap: break-word؛ wrap-strategy: 4 ؛ '>EM-CCD camera< td style = 'overflow: hidden؛ padding: 0px 3px؛ vertical-align: bottom؛ white-space: normal؛ word-wrap: break-word؛ wrap-strategy: 4؛ '>AndorDU-897E-CS0-#BViXon (مبرد إلى -80 درجة مئوية)MicroscopeNikonN / A< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Eclipse-E800Immersion object'lens objectiveNikonN / A< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>20x Fluor .5w تشريح المجهر مع التألقLeica MZ Fl IIIN / Aleica dissect scope and florescent lamp styleالمضخة التمعجيةGilsonN / AMinipuls 2< td style = 'overflow: hidden؛ padding: 0px 3px؛ vertical-align: bottom؛ white-space: normal؛ word-wrap: break-word؛ wrap-strategy: 4؛ '>TubingFisher Scientificيعتمد على السماكة< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>Tygon R3603, St-GobainPerfusion systemWarner64-0135 (VC-66CS) نظام التحكم في صمام التروية ، كامل ، مع صمامات قرصة ، 6 قنواتPerfusion regulatorsLeventon201108Dosi-flow 3Measurement and automation explorerSciences Wares & National InstrumentsN / Asoftware http://sine.ni.com/nips/cds/view/p/lang/en/nid/1380< td style = 'overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ white-space: normal؛ word-wrap: break-word؛ wrap-strategy: 4 ؛ '>photon imagerScience Wares & National Instruments< td style = 'overflow: hidden؛ padding: 0px 3px؛ vertical-align: bottom؛ white-space: normal؛ word-wrap: break-word؛ wrap-strategy: 4;'>N / A< td style='overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>software http://sine.ni.com/nips/cds/view/p/lang/en/nid/1380Photon viewerScience Wares & National IntumentsN / Asoftware http://sine.ni.com/nips/cds/view/p/lang/en/nid/1380<نمط td = 'overflow: مخفي ؛ الحشو : 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> Excel < td style = 'overflow: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المسافة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>Microsoft< td style = 'overflow: مخفي ؛ الحشوة: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ > N / Asoftware https://www.microsoft.comVirtual dubopen accessN / Asoftware http://virtualdub.sourceforge.net/