مقالة منهجية

الفحص المجهري ثنائي الفوتون للتصوير في الجسم الحي للأوعية الدموية الدقيقة لدماغ الفئران

مايو 29, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Source:< نمط الامتداد = '-webkit - نص - زخرفة - تخطي: لا شيء ؛ عائلة الخط: روبوت ، sans-serif ؛ حجم الخط: 10pt ؛ نمط الخط: عادي ؛ متغير الخط: عادي ؛ وزن الخط: 400 ؛ زخرفة النص - تخطي الحبر: لا شيء ؛ المحاذاة الرأسية: خط الأساس ؛ المساحة البيضاء: التفاف مسبق ؛ > Nishimura, C. القياس الكمي لعمارة الأوعية الدموية الدماغية باستخدام الفحص المجهري ثنائي الفوتون في نموذج الفأر للالتهاب العصبي الناجم عن فيروس نقص المناعة البشرية. J. Vis. Exp. (2016).

يوضح هذا الفيديو التصور في الجسم الحي للشعيرات الدموية القشرية في دماغ الفأر باستخدام الفحص المجهري ثنائي الفوتون. يحدد خطوات حقن صبغة فلورية في فأر مخدر بنافذة قشرية رقيقة الجمجمة ، وإعداد الإعداد للتصوير ، والحصول على صور مفصلة لهياكل الأوعية الدموية الدقيقة في الدماغ لتحليلها.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالنماذج الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية في JoVE.

{


1. حقن صبغة الفلورسنت

  1. اقرص جلد الفأر المخدر على الفخذ الأيسر الإنسي باستخدام ملقط # 5. اسحب الجلد برفق لأعلى واستخدم المقص لقص الجلد وإزالته. تحضير صبغة الرودامين المترافقة الباعثة للأحمر (70 كيلو دالتون) (10 مجم / كجم مذابة في محلول ملحي).
  2. حدد موقع الوريد الفخذي. باستخدام حقنة سعة 1 مل مع إبرة 30 جم متصلة ، ارسم محلولا معدا مسبقا من صبغة فلورية مناسبة للتصوير على خط 130 ميكرولتر من المحقنة. قم بإزالة جميع فقاعات الهواء عن طريق سحب الصبغة بالكامل في المحقنة ونقر جدار المحقنة بإحكام.
    1. قم بثني الإبرة 30 جم بزاوية 30 درجة تقريبا عن طريق الضغط عليها على سطح صلب مائل لأعلى. املأ الإبرة بالصبغة وتخلص من أي سائل زائد ، مع ترك عينة 100 ميكرولتر.
  3. حقن عينة 100 ميكرولتر من الصبغة ببطء في الوريد الفخذي. بعد إزالة الإبرة ، ضع ضغطا ثابتا ولطيفا على موقع الحقن لوقف أي نزيف. اترك الصبغة تدور لمدة 5 دقائق.
  4. أغلق الفخذ الأيسر عن طريق خياطة الجلد مع خياطة 4-0 ، ثم اقلب الماوس بحذر على بطنه ، وضعه في حزام غطاء رأس الماوس.

2. {{}} في الجسم الحي تصوير ثنائي الفوتون

  1. نقل الجهاز الجراحي إلى المجهر ثنائي الفوتون، التأكد من الحفاظ على مستويات التخدير المستمرة. ضع كمية صغيرة من محلول ملحي بنسبة 0.9٪ في خزان الصفيحة الأمامية وقم بخفض هدف المجهر بحيث يتلامس مع المحلول الملحي. حدد موقع منطقة الاهتمام باستخدام هدف عرض المجال الساطع.
  2. اضبط إثارة الليزر ثنائية الفوتون على طول موجي مناسب لصبغة الفلورسنت. ابدأ التصوير ثنائي الفوتون باستخدام هدف 25x.
    لاحظ أنه في هذه التجارب ، استخدمنا ديكستران مترافقا مع صبغة رودامين تنبعث منها أحمر كانت متحمسة بطول موجي يبلغ 780 نانومتر. تم استخدام مرشح انبعاث ممر النطاق 607/36 للكشف عن التألق من الصبغة ، وتم استخدام مرشح انبعاث ممر النطاق 480/20 للكشف عن التألق الذاتي للشريان.
  3. حدد موقع سرير شعري على شاشة العرض وقم بتكبير هذه المنطقة باستخدام التكبير/التصغير البصري 2. احصل على صور للشعيرات الدموية باستخدام برنامج التصوير ثنائي الفوتون.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

<فئة الشكل = 'جدول' >< فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: ثابت ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets root='1' data-sheets-baot = '1'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td style = 'border: 1px solid # 000000 ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ '> T / PUMP < td style = 'border-bottom: 1px solid # 000000 ؛ border-right: 1px solid # 000000 ؛ border-top: 1px solid # 000000 ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ '>Gaymar Industries، Inc.< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;border-top:1px solid #000000;overflow:hidden;boardding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>TP-500 < td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>TEC-4 Isoflurane VaporizerDatex Ohmeda< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'>447 < td style='border-bottom: 1px solid #000000؛ border-left: 1px solid #000000؛ border-right: 1px solid #000000؛ overflow: hidden؛ padding: 0px 3px؛ vertical-align: bottom;'>Extra Fine Bonn PencilFine Science Tools14084-08 Dumot #5 CouppsFine Science Tools11295-10 Invitrogen < td style = 'border-bottom: 1px solid # 000000 ؛ border-right: 1px solid # 000000 ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom;'>D-1830< td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> Olympus Fluoview 1000 AOM-MPM Multiphoton MicroscopeOlypmusFV-1000 MPE Spectra-Physics < td style = 'border-bottom: 1px solid # 000000 ؛ border-right: 1px solid # 000000 ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: bottom ؛ '> < td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:bottom;'> Amira SoftwareVisage Imaging

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة