عنوان تغليف الخلية عن طريق الرذاذ

البروتوكول

NIH3T3 الخلايا التحضير :

ألف لخلايا الطرد

1. يعرض للتريبسين الخلايا ، ثم تمييع 01:01 الخلية مع وسائل الاعلام ، ونقل من القارورة إلى T75 أنبوب 15 مل فالكون
2. تدور باستمرار إلى الخلايا بواسطة الطرد المركزي بيليه ، نضح طاف وغسل الخلايا مع DPBS
3. تدور أسفل الخلايا في بيليه مرة أخرى ، ونضح طاف
4. Resuspend الخلايا في وسائل الإعلام
5. تحديد كثافة الخلية مع عدادة الكريات (~ 200 X 10 ⁴ خلايا / مل في القارورة T75)
6. الطرد المركزي حل الخلية ، نضح طاف ، وresuspend في كمية مناسبة من وسائل الإعلام لتركيزات مختلفة الخلية

باء طرد الخليوي

1. قبل استخدام الخلايا دوامة لطرد
2. نقل 200 ميكرولتر من محلول الخلية إلى حقنة
3. تعيين وضع المناسبة على مولد النبض
   1. لإخراج واحدة قطرات قطرات متعددة (رشقات نارية) ، تعيين مولد النبض إلى "هاء BUR" واسطة
   2. لطرد قطرات متواصلة ، مجموعة المولدات النبض إلى وضع "القاعدة"
4. تغيير إعدادات إشارة
   1. تعيين مستوى ارتفاع وانخفاض مستوى الناتج الجهد : HIL إلى 5 والخامس LOL إلى 0 الخامس وتأكد من أن "LIM" على الصمام
   2. تعيين إشارة إلى نبضة مربعة
   3. تغيير مقدار الوقت اللولبي صمام مفتوح لطرد قطرات عن طريق تغيير قيمة عن "دور المرأة في التنمية" أو تغيير دورة العمل ("واجب")
   4. تغير وتيرة طرد عن طريق تغيير قيمة "لكل"
   5. تغيير عدد من قطرات في انفجار طرد عن طريق تغيير قيمة "بور"
5. إخراج حل الخلية على الركيزة التي أعدت للتصوير مع المجهر

جيم يلطخ

1. تشكل محلول الصبغة مع 0.5 ميكرولتر calcein - AM و 2 لكل ميكرولتر homodimer إيثيديوم مل من DPBS
2. تزج الركيزة أعد في محلول الصبغة
3. السماح لاحتضان عينة لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية قبل التصوير

التجربة التحقق من صحة

1. على مجهر الكسوف نيكون U TE - 2000 نيون
   1. بقعة البرامج المتقدمة (التشخيص ، المؤتمر الوطني العراقي)
   2. أعيش / الفحص الميت

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
مجهر فلوري		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
قاذف خلايا بصمام ملف لولبي				تردد التشغيل: 1 KHz، و30psi، و50nl~0.5ul. مشغل صمام 12V: تيار تشغيل 2.5 Amp
خزان هواء محمول سعة 5 جالونات		Coleman	Powermate CT5	هواء مضغوط: 30 PSI
منظمات ضغط		Marsh Bellofram
مولد نبضات			HP8112A	توليد تردد التشغيل: 50 MHz
منصة XYZ		Newmark Systems		مع محرك خطوي: منصة xy بمدى حركة 6inch (NLS4-6-25)، ومنصة z بمدى حركة 2.5inch (NLS4-2.5-25)، ووحدة تحكم ثلاثية المحاور (NSC-G3)، ودقة 0.1um
NIH 3T3	خط خلوي			خلايا ليفية
Trypsin				محلول بتركيز 0.05%
وسط زراعة خلايا NIH 3T3
DPBS	محلول منظم
T75				دوارق زراعة الأنسجة
أنابيب بلاستيكية مخروطية				15 ml، لزراعة الأنسجة