Method Article

عنوان تغليف الخلية عن طريق الرذاذ

DOI:

10.3791/316

⸱

October 1st, 2007

 ,  ,  ,  , 
1Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's, Harvard Medical School, 2Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's Hospital, 3Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 4Harvard-MIT Division of Health Sciences and Technology, Massachusetts Institute of Technology; Center for Biomedical Engineering, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital

In This Article

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH3T3 الخلايا التحضير :

ألف لخلايا الطرد

  1. يعرض للتريبسين الخلايا ، ثم تمييع 01:01 الخلية مع وسائل الاعلام ، ونقل من القارورة إلى T75 أنبوب 15 مل فالكون
  2. تدور باستمرار إلى الخلايا بواسطة الطرد المركزي بيليه ، نضح طاف وغسل الخلايا مع DPBS
  3. تدور أسفل الخلايا في بيليه مرة أخرى ، ونضح طاف
  4. Resuspend الخلايا في وسائل الإعلام
  5. تحديد كثافة الخلية مع عدادة الكريات (~ 200 X 10 4 خلايا / مل في القارورة T75)
  6. الطرد المركزي حل الخلية ، نضح طاف ، وresuspend في كمية مناسبة من وسائل الإعلام لتركيزات مختلفة الخلية

باء طرد الخليوي

  1. قبل استخدام الخلايا دوامة لطرد
  2. نقل 200 ميكرولتر من محلول الخلية إلى حقنة
  3. تعيين وضع المناسبة على مولد النبض
    1. لإخراج واحدة قطرات قطرات متعددة (رشقات نارية) ، تعيين مولد النبض إلى "هاء BUR" واسطة
    2. لطرد قطرات متواصلة ، مجموعة المولدات النبض إلى وضع "القاعدة"
  4. تغيير إعدادات إشارة
    1. تعيين مستوى ارتفاع وانخفاض مستوى الناتج الجهد : HIL إلى 5 والخامس LOL إلى 0 الخامس وتأكد من أن "LIM" على الصمام
    2. تعيين إشارة إلى نبضة مربعة
    3. تغيير مقدار الوقت اللولبي صمام مفتوح لطرد قطرات عن طريق تغيير قيمة عن "دور المرأة في التنمية" أو تغيير دورة العمل ("واجب")
    4. تغير وتيرة طرد عن طريق تغيير قيمة "لكل"
    5. تغيير عدد من قطرات في انفجار طرد عن طريق تغيير قيمة "بور"
  5. إخراج حل الخلية على الركيزة التي أعدت للتصوير مع المجهر

جيم يلطخ

  1. تشكل محلول الصبغة مع 0.5 ميكرولتر calcein - AM و 2 لكل ميكرولتر homodimer إيثيديوم مل من DPBS
  2. تزج الركيزة أعد في محلول الصبغة
  3. السماح لاحتضان عينة لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية قبل التصوير

التجربة التحقق من صحة

  1. على مجهر الكسوف نيكون U TE - 2000 نيون
    1. بقعة البرامج المتقدمة (التشخيص ، المؤتمر الوطني العراقي)
    2. أعيش / الفحص الميت

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مجهرنيكون إنستروكسيومEclipse TE-2000 U
قاذفتردد التشغيل: 1 كيلو هرتز ، 30 رطل / بوصة مربعة ، 50nl ~ 0.5ul. 12 فولت سائق الصمام: 2.5 أمبير محرك تيار
5 جالون خزانكولمانPowermate CT5الهواء المضغوط: 30 رطل لكل بوصة
مربعة منظمات الضغطمارش بيلوفرام
النبضHP8112Aتوليد تردد التشغيل: 50 ميجاهرتز
Newmarkالمرحلةمع محرك متدرج: 6 بوصة للسفر xy المرحلة (NLS4-6-25) ، 2.5 بوصة للسفر على شكل حرف Z (NLS4-2.5-25) ، وحدة تحكم ثلاثية المحاور (NSC-G3) ، دقة 0.1um
NIH 3T3الخلاياالليفية
الخطية التربسين0.05٪ محلول
NIH 3T3 خلية متوسطة
DPBSBuffer
T75قوارير ثقافة الأنسجة أنابيب
بلاستيكية مخروطية15 مل ، لزراعة الأنسجة
الفلورسنت خلية صمام الملف اللولبي هواء محمول مولد أنظمة XYZ

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell EncapsulationDroplet PrintingCell PrintingSolenoid ValveMotorized StageCell DensityHemocytometerLive Dead AssayCalcium AMEthidium Homodimer

Related Articles