تصوير وقياس التجديد المحوري في الخلايا العصبية العقدية الشبكية للفئران

الملخص

المصدر: Portela-Lomba, M., et. al. الزراعة المشتركة للخلايا العصبية العقدية الشبكية للفئران ذات التغليف الشمي Glia ، كنموذج في المختبر لتجديد الجذر المحوري للبالغين. J. Vis. Exp. (2020).

يوضح هذا الفيديو تصوير وقياس التجديد المحوري في الخلايا العصبية العقدية الشبكية للفئران (RGNs) المزروعة بشكل مشترك مع الخلايا الدبقية الشمية البشرية الخالدة. RGNs ذات علامات مناعية ، مع سوما حمراء ومحاور خضراء. تم التقاط الصور باستخدام مجهر التألق ، وتم تحديد النسبة المئوية للخلايا العصبية ذات المحور العصبي ومؤشر التجديد المحوري باستخدام برنامج التصوير.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات من والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. ثقافة التغليف الشمي البشري الدبقية (ihOEG و Ts12 و Ts14)

ملاحظة: يتم هذا الإجراء في ظل ظروف معقمة في خزانة السلامة الحيوية لزراعة الأنسجة.

1. تحضير 50 مل ME10 OEG استزراع متوسط.
2. تحضير 5 مل من Dulbecco's Modified Eagle Medium أو DMEM/F12-Fetal Bovine Serum (FBS) ، في أنبوب مخروطي سعة 15 مل.
3. قم بتسخين كلتا الوسائطين عند 37 درجة مئوية في حمام مائي نظيف لمدة 15 دقيقة.
4. قم بإذابة قوارير خلايا Ts12 و Ts14 عند 37 درجة مئوية في حمام مائي نظيف.
5. قم بإعادة تعليق الخلايا وإضافتها إلى وسط استزراع DME....

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول' >< فئة الجدول = 'ck-table-ressize'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات antibody 514المرجع 34 مصل الأرنب متعدد النسيلة ، والذي يتعرف على MAP2A و B.الجسم المضاد SMI-31BioLegend801601الجسم المضاد أحادي النسيلة ضد بروتينات MAP1B و NF-Hالجسم المضاد للفأر Alexa Fluor 488ThermoFisherA-21202 المضاد للأرانب Alexa Fluor 594 الجسم المضادThermoFisherA-21207 B-27 مكملGibco17504044 D ، L-2-amino-5-phosphonovaleric acidمثبط مستقبلات سيجما283967NMDA DAPISigmaD9542صبغة الفلورسنت النواةDMEM-F12Gibco11320033وسط زراعةالخلايا FBSGibco11573397مصل بقري الجنينFBS-HycloneFisher Scientific16291082مصل الأبقار الجنينيFluoromountSouthern Biotech0100-01تصاعد متوسطImageJالمعاهد الوطنية للصحة (المعاهد الوطنية للصحة - الولايات المتحدة الأمريكية) برنامج الصورL-GlutamineLonzaBE17-605F Neurobasal mediumGibco21103049الخلايا العصبية ثقافة الخلايا العصبية متوسطنظام تفككغراء شركة ورثينجتون للكيمياء الحيويةLK003150للاستخدام في الخلايا العصبية عزلPBSمحلي الصنع PBS-EDTALonzaH3BE02-017F البنسلين / الستربتومايسين / الأمفوتريسين بلونزا17-745Eمستخلص الغدة النخامية للجراثيم والجراثيم جيبكو13028014مستخلص الغدة النخامية البقريبولي إل ليسين (PLL) سيجماA-003-M