Method Article

تصوير الخلايا باستخدام الفحص المجهري الفلوري للانعكاس الداخلي الكلي

June 17th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Daniele, F., et. al مجسات GFP الحساسة للأس الهيدروجيني والأس الهيدروجيني لتقييم ديناميكيات حويصلة الناقل العصبي في خلايا الورم الأرومي العصبي SH-SY5Y: تصوير الخلايا وتحليل البيانات. J. Vis. Exp. (2015).

يوضح هذا الفيديو تصوير خلايا الورم الأرومي العصبي البشري باستخدام مجهر مضان الانعكاس الداخلي الكلي (TIRF) لتصور الحويصلات المشبكية الموسومة بالفلوروفور. يتم تركيز الخلايا أولا في وضع التألق. ثم يتم إجراء التعديلات لتحقيق الانعكاس الداخلي الكلي ، مما يؤدي إلى توليد موجات زائلة تثير الفلوروفورات بشكل انتقائي بالقرب من الغشاء. قبل تصوير TIRF ، يتم تكوين معلمات الاستحواذ ، ويتم ضبط تردد أخذ العينات.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. زراعة الخلايا والتعدي

  1. SH-SY5Y زراعة الخلايا
    ملاحظة: تم إجراء التجارب باستخدام الورم الأرومي العصبي البشري SH-SY5Y (ATCC # CRL-2266). تنمو خلايا SH-SY5Y كمزيج من العناقيد العائمة والخلايا الملتصقة. اتبع التعليمات الواردة في البروتوكول (كثافة الخلية ، نسبة الانقسام ، إلخ) للحصول على خلايا تنمو مرتبطة بإحكام بالغطاء الزجاجي ، وهو أمر بالغ الأهمية للفحص المجهري الفلوري للانعكاس الداخلي الكلي (TIRFM).
    1. قبل البدء ، تحت خزانة السلامة الحيوية ذات التدفق الصفحي ، اصنع الحجم المناسب لمحلول ملحي عازلة الفوسفات المعقم (PBS) ووسط الاستزراع.
      1. اصنع 50 مل من PBS بت....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

الشكل 1. إعداد مجهر TIRF. عرض تخطيطي وصورة (داخلية) لنظام المجهر TIRF. يشتمل الإعداد على مجهر مقلوب آلي Axio Observer Z1 (A) ، وليزر أرجون أيون متعدد الخطوط بقدرة 100 ميجاوات (B) ، ومنزلق TIRF (C). يظهر ضوء الليزر (الخط الأخضر) والضوء الأبي.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Equipment
Axio Observer Z1Zeiss491912-9850-000 مقلوب microscopehttp://www.zeiss.com/microscopy/en_de/products/light-microscopes/axio-observer-for-biology.html#introduction
ليزر الأرجون متعدد الخطوط لاسوس 77لاسوس00000-1312-752multi-line (458/488/514 nm) ، 100mW أرجون أيون laserhttp://www.lasos.com/products/argon-ion-laser
ليزر TIRF المنزلقZeiss423681-9901-000http://www.zeiss.com/microscopy/en_de/products/imaging-systems/single-molecular-imaging-laser-tirf-3.html
100x الهدفزايس421190-9900-000النفط ، NA 1.45 Alpha-Planhttps://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=o&a=v&m=a&id=421190-9900-000&ss=1
CCD Camera RetigaSRV Fast 1394QImaging http://www.qimaging.com/products/datasheets/Retiga-SRV.pdf
مبدل الفلتر البصري LAMBDA 10-3 معشركةSmartShutter Sutter Instrument Companyhttp://www.sutter.com/IMAGING/lambda103.html
صورة البرمجيات
ProPlus 6.3 SoftwareMedia Cybernetics تحديد البقعة, اختيار عائد الاستثمار, كثافة التألق determinationhttp://www.mediacy.com/index.aspx?page=IPP
ExcelMicrosoft تصحيح التبييض الضوئي ، الخلية الكاملة وحويصلة واحدة analyseshttp://office.microsoft.com/it-it/excel/
GraphPad Prism 4.00GraphPad Software، Inc. statistical analysishttp://www.graphpad.com/scientific-software/prism/

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Total Internal Reflection FluorescenceTIRF MicroscopyNeuroblastoma CellsSynaptic VesiclesEpifluorescence ModeEvanescent WaveAcquisition SettingsSampling FrequencyFluorophore tagged MembranesCritical Angle Adjustment

Related Articles