الفحص المجهري الفلوري للانعكاس الداخلي الكلي لتصور الأحداث الغريبة

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Winkle, C. C., et al. استخدام المنهجيات المجمعة لتحديد دور توصيل غشاء البلازما أثناء تفرع المحور العصبي وتكوين الخلايا العصبية. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو الفحص المجهري الكلي لمضان الانعكاس الداخلي (TIRF) لتصور الأحداث الخارجية في الخلايا العصبية القشرية. تتألق علامة البروتين الفلوري الأخضر الحساس للأس الهيدروجيني (GFP) عند اندماج الحويصلة ، مع إثارة TIRF الانتقائية التي تلتقط إفراز الخلايا الغشائية القريبة في التصوير بفاصل زمني.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تصوير الأحداث الخارجية عبر الفحص المجهري لمضان الانعكاس الداخلي الكلي (TIRF)

ملاحظة: يتطلب هذا البروتوكول معدات مجهرية متخصصة ، بما في ذلك غرفة بيئية للحفاظ على درجة الحرارة والرطوبة وثاني أكسيد الكربون (CO₂) ، ومجهر مضان الانعكاس الداخلي الكلي المقلوب (TIRF) المجهز بإضاءة فائقة الفلورية ، وهدف TIRF للتكبير العالي / الفتحة العددية العالية (NA) ، وXYZ آلي المرحلة ، وكاشف الجهاز المقترن بالشحن الحساس (CCD). يستخدم هذا البروتوكول مجهرا مقلوبا مؤتمتيا بالكامل مزودا بهدف NA TIRF 100x 1.49 ، وليزر الحالة الصلبة 491 نانومتر ، ومضاعف للإلكترون CCD (EM-CCD). يتم التحكم في جميع المعدات عن طريق برامج التصوير والتحكم بالليزر. قبل بدء بروتوكول التص....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'> List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments 35mm glass bottom live cell imaging cell platesmatek Corporationp356-1.5-14-Cيجب أن تكون مغلفة ب 1 مجم / مل بولي دي ليسين وشطفها قبل خلايا الطلاءأوليمبوس IX81-ZDC2 المجهر المقلوبأوليمبوس أوليمبوس لامدا LS مصباح زينونشركة Sutter Instruments شركة المرحلة البيئية الحاضنة العلويةTokai Hit 100x 1.49 NA TIRF الهدفOlympus Andor iXon EM-CCDAndor Cell برنامج التحكم TIRFOlympus Software المستخدم للتحكم ليزر لتصوير TIRFفيجي (الصورة J) المعاهدالوطنية للصحة ImageJ الإصدار 1.49t الأرنب متعدد النسيلة مضاد للإنسان VAMP2إشارات الخلية11829 Poly-D-lysineSigmap-7886مذاب في ماء معقم عند 1 مجم / مل

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission