تغليف عامل نمو الأعصاب في الجسيمات النانوية عالية الكثافة التي تحاكي البروتين الدهني

الملخص

المصدر: Zhu، J.، وآخرون، إعداد وتوصيف الجسيمات النانوية الجديدة التي تحاكي HDL لتغليف عامل نمو الأعصاب. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو التجميع التدريجي للجسيمات النانوية المحملة بتقنية HDL المحملة ب NGF باستخدام التغليف بمساعدة البروتامين والتجميع الذاتي القائم على الدهون لتطبيقات توصيل التغذية العصبية المحتملة.

البروتوكول

1. تحضير الجسيمات النانوية التي تحاكي NGF HDL

1. قم بإذابة السواغات ، الفوسفاتيديل كولين (PC) ، السفينجوميلين (SM) ، الفوسفاتيديل سيرين (PS) ، كوليستيريل أوليات (CO) ، و D-α-tocopheryl البولي إيثيلين جلايكول سكسينات (TPGS) ، في الإيثانول لتحضير محاليل المخزون عند 1 مجم / مل
   ملاحظة: تم اقتباس محاليل المخزون وتخزينها عند -20 درجة مئوية. تم تخزين أوليات الكوليسترول في زجاجات داكنة. كانت حلول مخزون PC و SM و PS و CO مستقرة لمدة تصل إلى 6 و 3 و 12 و 12 شهرا ، على التوالي ، عند -20 درجة مئوية. كان محلول TPGS مستقرا لمدة 12 شهرا على الأقل عند -20 درجة مئوية.
2. امزج 10 ميكرولتر من NGF (1 مجم / مل في الماء) مع 10 ميكرولتر من البروتامين USP (1 مجم / مل في الماء) في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل واتركه يقف لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة لتشكيل المركب.
   ملاحظة: تم اقتباس محاليل مخزون NGF والبروتامين وتخزينها عند -20 درجة مئوية. لا ينصح بالتجميد والذوبان المتكرر لمخزون NGF.
3. أضف 59 ميكرولتر من الكمبيوتر الشخصي ، و 11 ميكرولتر من SM ، و 4 ميكرولتر من PS ، و 15 ميكرولتر من ثاني أكسيد الكربون ، و 45 ميكرولتر من TPGS إلى قارورة زجاجية. امزج الإيثانول وتبخره تحت تيار نيتروجين لطيف لمدة 5 دقائق تقريبا ؛ يجب أن تشكل جميع السواغات طبقة زيتية رقيقة في الجزء السفلي من القارورة الزجاجية.
4. أضف 1 مل من الماء فائق النقاء (النوع 1) إلى القارورة وقم بتجانسها عند 9,500 دورة في الدقيقة (8,600 × جم) لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة لتشكيل النموذج الأولي للجسيمات النانوية (NPs).
5. أضف المركب المحضر في الخطوة 1.2 إلى النموذج الأولي NPs واحتضنه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة مع التقليب باستخدام قضيب تقليب صغير في القارورة الزجاجية.
6. قم بتبريد NPs عن طريق التقليب في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة أخرى. بعد أن يبرد هذا ، أضف 106 ميكرولتر من Apo A-I (1.49 مجم / مل) وحركها في درجة حرارة الغرفة طوال الليل لتشكيل NPs النهائية التي تحاكي NGF HDL.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات المؤتلف البشري Beta-NGFالإبداعي BiomartNGF-05H L-a-phosphatidylcholine (PC) Avanti 131601P95٪ ، البيض ، الدجاجSphingomyelin (SM) Avanti860062Pالدماغ ، لحم الخنزيرفوسفاتيديل سيرين (PS)أفانتي840032Pالدماغ ، لحم الخنزيركولستريل أوليات (CO) سيجماC9253 D-α-توكوفيريل بولي إيثيلين جلايكول سكسينات (TPGS)BASF9002-96-4فيتامين ه بولي إيثيلين جلايكول سكسيناتكبريتات البروتامينSigmaP3369يفي بمواصفات اختبار USPصميم البروتين الشحمي A1 ، البلازما البشريةأثينا للأبحاث والتكنولوجيا16-16-1201011 مجم في 671 ميكرولتر 10 ملي مولار بيكربونات الأمونيوم ، درجة الحموضة 7.4الخالطTekmarT 25-S1 بوليترون الخالطKinematicaPT 1200C