التوصيل الوريدي لحاصرات المستقبلات لتقليل وذمة الدماغ في نموذج الفأر

الملخص

المصدر: Zeynalov، E. et al.، التسريب الوريدي المستمر هو طريق العلاج المفضل لحاصرات مستقبلات الأرجينين فازوبريسين Conivaptan في الفئران لدراسة وذمة الدماغ التي تثيرها السكتة الدماغية. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو التوصيل الوريدي لمضاد مستقبلات الأرجينين فازوبريسين (AVP) في نموذج الفأر. يؤدي انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر إلى حدوث وذمة في الدماغ. يتم إعطاء مضاد مستقبلات AVP من خلال قسطرة في الوريد الوداجي الأيسر ، مما يخفف من الوذمة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. في Vivo Stroke Induction

قم

1. بتغطية الفتيل مسبقا براتنج الأسنان قبل الجراحة.
   1. قطع قطعة خيوط بطول 12 مم من خياطة نايلون 7-0. امزج جزأين من الراتنج مع جزء واحد من المقسى ، ثم اغمس طرف الفتيل على الفور في الخليط لتغطية حوالي 1/3 من الطول بالكامل. قم بإزالته بسرعة وتحقق من تغطيته بطبقة أملسة من راتنج الأسنان.
   2. جفف الفتيل بالهواء لمدة 2 ساعة قبل الاستخدام.
2. ضع الماوس في غرفة تحريض التخدير (حجم 2 لتر) ، واضبط تدفق 1.5٪ من الأيزوفلوران في هواء الغرفة المخصب بالأكسجين بنسبة 25٪ عند 2 لتر / دقيقة عند الدخول إلى الغرفة.
3. اسمح للفأر بالبقاء في غرفة الحث حتى يتم تخديره بالكامل ، كما هو محدد بسبب عدم الاستجابة لقرص الذيل.
4. ضع الماوس على طاولة العمليات باستخدام وسادة ساخنة ، واضبط تركيز الأيزوفلوران على 1٪ للحفاظ على التخدير الذي يتم توصيله تلقائيا من خلال مخروط الأنف.
5. قص الشعر على الجزء الأمامي والخلفي من الرقبة ، ورش الرقبة بالكحول المحمر. ضع مرهم العيون البيطري على كلتا العينين.
6. لمراقبة درجة حرارة الجسم باستمرار ، استخدم مسبار درجة حرارة المستقيم المتصل بشاشة رقمية أثناء الجراحة.
7. ضع الفأر في وضع ضعيف ، وقم بتطبيق محلول فرك بوفيدون اليود 10٪ للتطهير ، وقم بتغطيته بستارة معقمة ، ثم قم بعمل شق خط الوسط على طول الرقبة بشفرة مشرط جراحية مقاس 10.
8. ربط الشريان السباتي المشترك الأيسر مؤقتا بخياطة حريرية 6.0.
9. ضع ربطة عنق أخرى على الشريان السباتي الخارجي الأيسر (ECA).
10. ضع مشبكا للأوعية الدموية الدقيقة على الشريان السباتي الداخلي (ICA).
11. قطع ثقب صغير على الشريان السباتي الخارجي بمقص الأوعية الدموية الدقيقة. أدخل خيوطا مصنوعة من خياطة نايلون 7-0 مطلية براتنج الأسنان في الفتحة في ECA ، وقم بتقدمها رأسيا ، أثناء إزالة المشبك ، حتى تشعر بالمقاومة (حوالي 5-7 مم من نقطة التشعب في CCA).
12. ضع ربطة عنق مؤقتة على الشريان السباتي الداخلي لتثبيت الفتيل في موضعه. راجع الرسم البياني ، الشكل 1 أ. أغلق الجلد بخياطة حريرية ، وتسلل إلى الجرح الموجود في مقدمة الرقبة باستخدام 0.2 مل من 0.5٪ بوبيفاكائين ، كما في الخطوة 2.6.
13. اسمح للفأر بالاستيقاظ من التخدير واستعادة وعيه في غرفة التعافي لمدة 60 دقيقة. لا تترك دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الراقد القصي.
14. اختبر الفأر بحثا عن تسجيل العجز العصبي (NDS) على النحو التالي: 0 = الوظيفة الحركية الطبيعية ، 1 = ثني الجذع والطرف الأمامي المقابل عند رفع الذيل ، 2 = الدوران إلى الجانب المقابل ولكن الموقف الطبيعي أثناء الراحة ، 3 = الميل إلى الجانب المقابل أثناء الراحة ، 4 = لا يوجد نشاط حركي تلقائي.
    1. لاختبار NDS ، ارفع الماوس من الذيل وضعه على سطح مستو للمراقبة (2-3 دقائق). بدلا من ذلك ، راقب الفئران في غرفة الاسترداد. استبعاد الفئران التي تظهر عليها NDS أقل من 2 من التجربة بسبب عدم كفاية انسداد الشريان السباتي الأوسط (MCA).
       NOTE: يمكن استخدام تقنية قياس التدفق بالليزر دوبلر لتأكيد انسداد MCA.
15. أعد تخدير بعد 60 دقيقة من الشفاء في غرفة الحث كما هو موضح أعلاه ، وأعد تعقيم شق الجلد السابق بمحلول مقشر بوفيدون اليود بنسبة 10٪ ، وأعد فتح الجرح الجراحي في مقدمة الرقبة عن طريق قطع وإزالة خياطة الحرير.
16. لإزالة الفتيل من ECA, تنفيذ الخطوات التالية:
    1. ضع مشبك الأوعية الدموية الدقيقة على ICA. قم بفك الخيط الموجود على ICA واسحب الفتيل للخارج أثناء فتح المشبك
    2. أغلق المشبك وضع ربطة عنق على ECA بالقرب من القطع.
    3. قم بإزالة المشبك والرباط من CCA لاستعادة تدفق الدم إلى الدماغ. راجع الرسم البياني ، الشكل 1 ب.

2. تركيب قسطرة وريدية (IV) في الوريد الوداجي للعلاج المستمر لمدة 48 ساعة

ملاحظة: انتقل إلى تركيب القسطرة مباشرة بعد الخطوة 1.16.3 دون إيقاظ الماوس.

1. استخدم حجمين مختلفين من الأنابيب المرنة: أدخل الأنبوب الداخلي (القطر الخارجي 0.94 مم ؛ لاحتواء الدواء الذي يتم ضخه) في الأنبوب الخارجي (3.18 مم القطر الخارجي ؛ لحماية الأنبوب الداخلي).
2. ضع الفأر في وضع الانبطاح ، وقم بتطبيق محلول مقشر بوفيدون اليود بنسبة 10٪ للتطهير ، وقم بعمل شق 1 سم على الجزء الخلفي من الرقبة بشفرة مشرط جراحية مقاس 10. اقلب الفأر إلى وضع ضعيف ، وأعد تعقيم الجزء الأمامي من الرقبة بمحلول مقشر بوفيدون اليود بنسبة 10٪ ، وأعد فتح الجرح الجراحي في مقدمة الرقبة. نفق الأنبوب تحت الجلد من الشق الذي تم إجراؤه على الظهر إلى مقدمة الرقبة ، وقم بإخراجه من الجرح المفتوح 1 سم.
3. قم بإزالة الأنسجة الدهنية تحت الجلد من الجانب الأيسر من مقدمة الرقبة على بعد حوالي 1 سم بشكل جانبي من خط الوسط. حدد موقع الوريد الوداجي الأيسر ، ضع ربطتين على طول الوريد على بعد 5 مم ، وقم بتمديد الوريد قليلا. قم بعمل ثقب صغير في الوريد الوداجي بين العلاقتين باستخدام مقص الأوعية الدموية الدقيقة ؛ أدخل طرف الأنبوب الداخلي بعمق 5 مم ذيليا (باتجاه القلب).
4. قم بتأمين الأنبوب بكلا الروابط بالوريد الوداجي. أغلق الجلد في مقدمة الرقبة بخياطة حريرية 3-0. راجع الرسم البياني ، الشكل 1C.
5. قم بتثبيت الأنبوب على الجلد الموجود في مؤخرة الرقبة بخياطة ، وقم بتوصيل الأنبوب بمضخة ضخ وريدي دقيقة من خلال دوار. يسمح الدوران بحرية حركة الفئران داخل القفص مع الوصول الكامل إلى الطعام والماء.
6. تسلل إلى شقوق الجلد في الجزء الأمامي والخلفي من الرقبة باستخدام 0.2 مل من 0.5٪ بوبيفاكائين لمنع ألم ما بعد الجراحة.
   ملاحظة: اعتمادا على بروتوكولات الخاصة بالمؤسسات ، يمكن علاج بالمواد الأفيونية أو العقاقير غير الستيرويدية المضادة للالتهابات (NSAIDs) أو المضادات الحيوية قبل الجراحة وبعدها. ومع ذلك ، فإن العلاجات المذكورة قد تغير نتائج نتيجة السكتة الدماغية الإقفارية.
7. اسمح للحيوان بالاستيقاظ في غرفة التعافي ، ثم ضع في قفص منفصل حتى نهاية التجربة. لا تترك دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الراقد القصي.
8. ضبط معدل التسريب للعلاج الوريدي المستمر لمدة 48 ساعة للكونيبتان (0.14 ملغم/مل في 5٪ سكر العنب) أو السيارة عند 1.5 مل/كغ/ساعة، وبدء التسريب.
   ملاحظة: يجب أن تكون الكمية الإجمالية للكونيبتان المنقوق بالوريد حوالي 0.2 ملغم/فأر/يوم بحجم إجمالي قدره 1.44 مل.

النتائج

فئة الشكل = 'صورة image_resized image-style-align-center' style='display: table؛ margin-left: auto؛ margin-right: auto ؛ width: 75٪ ؛ '>

الشكل 1: رسم تخطيطي لنموذج السكتة الدماغية التجريبي ، وتركيب القسطرة الوريدية ، وحجم الاحتشاء التمثيلي في 48 ساعة بعد السكتة الدماغية. موضع الفتيل (كما هو موضح باللون الأزرق) مغطى مسبقا بالراتنج (الأخضر) في الشريان السباتي الداخ...

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Heated PadK&H Manufacturing Inc1060 جهاز مراقبة درجة الحرارة مع مسبار المستقيمPhysitemp7029 بكرة خياطة حريرية ، 6-0شركة التخصصات الجراحيةSP114 خياطة حريرية على إبرة ، خياطة نايلون 3-0إيثيكون1684 جرام ، 7-0إيثيكون1696 جرام راتنج الأسنان بولي سيلوكسان مع مقويHeraeus Kulzer65817930 مضخة ضخ رابعةكينت ScietificGT0897 قطب 22GAInstech375 / 22PS أنابيب المختبر ، 0.94 × 0.51 مم أنابيب مختبرية داو كورنينج508-002 ، 3.18 × 1.98 ملمداو كورنينج508-009