الحقن الفيروسي التجسيمي لتحرير الجينات العصبية المستهدفة في دماغ الفأر

الملخص

المصدر: Fricano-Kugler, C. J., et al. تصميم وتعبئة وتسليم فيروسات CRISPR الرجعية عالية الارتفاع والعدسات عبر الحقن التجسيمي. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو الحقن الفيروسي التجسيمي لتحرير الجينات العصبية بدقة في دماغ الفأر. يضمن البروتوكول توصيل الفيروس بدقة إلى التلفيف المسنن ، مما يتيح وضع العلامات الفلورية والضربة القاضية الجينية بوساطة كريسبر لدراسة الدوائر العصبية ووظيفة الجينات وآليات المرض في الجسم الحي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. الحقن التجسيمي

1. تأكد من أن التهوية إلى جناح الجراحة مفتوحة لضمان تدفق الهواء المناسب. جهز الفأر للجراحة عن طريق تخديره بنسبة 4٪ من الأيزوفلوران في غرفة الحث. بعد التخدير ، احلق الرأس لتحضير موقع الحقن.
   1. ضع الماوس في أداة التجسيم باستخدام ملاقط لتحريك اللسان لأسفل وإلى الجانب. أدخل قضيب العض في الفم حتى تسقط الأسنان في الفتحة ، ثم قم بتأمين قضبان الأذن. تأكد من أن جسم الماوس على وسادة التدفئة وأن الأنف موجود في مخروط الأنف. مباشرة 4٪ أيزوفلوران في مخروط الأنف. تأكد من التخدير عن طريق الضغط على القدم بالملاقط وا....

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول' >< فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td colspan = '2'> كواشف الجراحة التجسيمية الحقنة البيطرية استخدام الطبيب البيطري للحقنة TB حقنة فقط 1cc luer slip TB 100 / bxMed-Vet International1CCVLS Isoflurane  شفرات مشرط من الفولاذ المقاوم للصدأ ، # 10 ، 100 قطعة من Med-Vet InternationalJOR580S مرهم دموع اصطناعيMed-Vet InternationalRXPARALUBE-O PVP PrepSolutionMed-Vet InternationalHPIV108208H Normal SalineMed-Vet InternationalDYND500MLSH قضيب القطن ذو الرؤوسMed-Vet InternationalCTA6 مرهم مضاد حيوي ثلاثيMed-Vet InternationalRXTRIP-OI15 MONOJECT® Needles Soft 25 جم × 5/8 بوصة Med-Vet International25058 6-0 خيوط حريريةMed-Vet InternationalMV-711