العلاج داخل المخ البطيني بسم الراتينيفراتوكسين لإزالة التحسس TRPV1 في دماغ الفأر

الملخص

المصدر: Fukushima, A., et al. العلاج داخل المخ البطيني ب Resiniferatoxin واختبارات الألم في الفئران. J. Vis. Exp. (2020)

يوضح هذا الفيديو إجراء الحقن داخل البطين للراتينيفراتيكسين في الفئران لإزالة حساسية مستقبلات TRPV1 في الدماغ.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. الحقن داخل البطين من RTX

1. تخدير الفئران بملح الصوديوم البنتوباربيتال (60 مجم / كجم ، داخل الصفاق) ، والتحقق من فقدان منعكس التصحيح.
2. للعلاج داخل المخ البطيني (i.c.v.) ، حقن 5 ميكرولتر من راتينيفراتيكسين (RTX) (20 ميكروغرام / مل) في البطين الجانبي الأيمن. بالنسبة للمجموعة الضابطة ، قم بحقن السيارة (10٪ إيثانول ، 10٪ بولي أوكسي إيثيلين (20) أحادي سوربيتان و 80٪ سائل دماغي نخاعي اصطناعي (ACSF)) بنفس الطريقة.
   1. مرر إبرة 27 جم يمكن التخلص منها عبر أنبوب معدني (معرف 0.8 مم) لكشف طرف الإبرة 3.0-3.5 مم (الشكل 1 أ).
   2. قم بتطهير رأس الفأر بنسبة 70٪ كحول وامسك عظام الحرشفية للفأر بإحكام بالأصابع (الشكل 1 ب). ملاحظه: انتبه إلى مواضع النتوءات الحرشفية ، لأن هذه النتوءات ستكون بمثابة معالم للحقن.
   3. حرك الإبرة بشكل جانبي على فروة الرأس وابحث عن الخيط السهمي حيث يتم ربط طرف الإبرة بالخياطة.
   4. حرك الطرف حوالي 1 مم إلى اليمين ، ثم حرك الطرف بشكل منحرف ، وابحث عن الخيط الإكليلي. (الشكل 1 ب).
   5. أدخل الإبرة ببطء وعموديا ، وحقن محلول RTX في حوالي 10 ثوان ، واستمر في الاحتفاظ بها لمدة 10 ثوان تقريبا.
   6. اسحب الإبرة ببطء وأعد الفأر إلى قفص منزله. عادة ما يكون النزيف ضئيلا أو غائبا. في حالة حدوث نزيف كبير ، يجب التفكير في استخدام فأر آخر.

النتائج

فئة الشكل = 'الصورة image_resized image-style-align-center' style='display: table؛ margin-left: auto؛ margin-right: auto ؛ width: 75٪ ؛ '>

الشكل 1: مناظر فوتوغرافية وتخطيطية للحقن داخل المخ البطيني (i.c.v.) (أ) الإبرة المستخدمة في حقن الوريد الوريدية. (ب) مخطط جمجمة الفأر وحركة طرف الإبرة. تظهر عظام الحرشفية باللون الأزرق.

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resized'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ResiniferatoxinLKT LaboratoriesR1774المستخدمة في المعالجات المسبقة s.c. / i.c.v. واختبار RTXملح الصوديوم بنتوباربيتالطوكيو للصناعة الكيميائيةP0776المستخدم في التخديرالإيثانول (99.5٪)واكو الصناعات الكيماوية النقية057-00456المستخدمة لإذابة RTXبولي أوكسي إيثيلين (20) سوربيتان مونولياتواكو للصناعات الكيماوية النقية161-21621تستخدم لإذابة RTX25 مل حقنة دقيقةهاميلتون1702LTالمستخدمة في حقن IV26 مقياس إبرة يمكن التخلصمنها TERUMONN-2613Sالمستخدمة في حقن الوريد