تقييم التأثيرات الوقائية العصبية للتكييف الحمضي في نموذج فأر لنقص تروية الدماغ.

الملخص

المصدر: Zheng، Y.، et al. نماذج تجريبية لدراسة الحماية العصبية للتكييف الحمضي ضد نقص التروية الدماغية. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو تطبيق التكييف الحمضي (APC) لتقييم آثاره الوقائية العصبية ضد الإصابة الإقفارية في نموذج فأر لانسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO). يحدد الخطوات المتضمنة في إعادة التروية في نموذج MCAO وتطبيق APC أثناء إعادة التروية للتخفيف من السمية المثيرة والإجهاد التأكسدي وموت الخلايا العصبية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO):
   1. ضع وثبت الفأر المخدر (باستخدام مسبار قياس التدفق بالليزر (LDF) المتصل بجمجمته) في وضع ضعيف وحافظ على درجة حرارة جسمه باستخدام مصباح حراري طوال الجراحة. تطهير الرقبة بالكحول الإيثيلي بنسبة 70٪.
   2. قم بعمل شق جلدي متوسط في الرقبة باستخدام مشرط ؛ تشريح الأنسجة الرخوة بشكل حاد باستخدام ملقط لكشف الأوعية. أضف قطرة واحدة من المحلول الملحي إلى الأنسجة المكشوفة للحفاظ على رطوبتها.
   3. تشريح الشريان السباتي المشترك من الأنسجة المحيطة والعصب المبهم باستخدام ملقط العين. احرص على عدم إتلاف العصب المبهم. تطهير جلد الرقبة مرة أخرى باليودوفور بعد تعرض الشريان السباتي المشترك.
   4. ضع مشبك وعاء صغير في الطرف البعيد للشريان السباتي المشترك ثم اربط عقدة ميتة ب 6-0 خيوط حريرية في الطرف القريب. ضع المشبك في أقرب وقت ممكن للعمليات اللاحقة. تأكد من أن طول الوعاء بين المشبك والعقدة الميتة أطول فترة ممكنة للعمليات اللاحقة.
   5. اصنع خياطة مؤقتة قريبة من المشبك عن طريق ربط عقدة فضفاضة. تأكد من وجود مسافة كافية بين عقدتين لإدخال الشعيرات الأحادية.
   6. قم بعمل شق طولي صغير بين العقدتين بمقص عيون دقيق. تأكد من أن الشق قريب من العقدة الميتة قدر الإمكان للعمليات اللاحقة. احرص على عدم قطع الوعاء.
   7. أدخل خيوطا أحادية بطول 12 مم من خلال الشق لدخول تجويف الشريان ودفعه بضعة مم. شد العقدة السائبة حول طرف الشعيرات الأحادية ثم قم بإزالة المشبك.
   8. تقدم الفتيل إلى الشريان السباتي الداخلي (10 مم لإغلاق الشريان الدماغي الأوسط) باستخدام ملقط العين حتى يظهر برنامج LDF انخفاضا حادا (انخفاض بنسبة >80٪ عن تدفق الدم الأساسي) في تدفق الدم. سجل وقت بدء الانسداد.
   انسداد
   9. الشريان الدماغي الأوسط لمدة 1 ساعة. اقطع مسبار LDF وضع الفئران في حاضنة 30 درجة مئوية طوال مدة الانسداد.
2. إعادة التروية والتكييف الحمضي (APC):

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Laser Doppler FlowmetryMoor Instruments LtdModel Moor VMS-LDF2 ثنائي إيثيل الأثير اللامائيSinopharm Chemical Reagent Corporation80059618 Trichloroacetaldehycle hydrateشركة Sinopharm للكاشف الكيميائي30037517